技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種白僵菌菌株及其應(yīng)用，尤其涉及一種球孢白僵菌HFW-05菌株及其在防治蔬菜粉虱、小菜蛾等害蟲的應(yīng)用。

背景技術(shù)

近年來，隨著設(shè)施蔬菜的發(fā)展，粉虱、小菜蛾已成為蔬菜的重要害蟲，白粉虱自1976年在我國北方大規(guī)模爆發(fā)以來，一直危害嚴(yán)重。近幾年來，煙粉虱也在北京、河北、新疆、天津、廣州等地相繼爆發(fā)，造成蔬菜特別是設(shè)施蔬菜嚴(yán)重損失，嚴(yán)重時可減產(chǎn)達7成以上。小菜蛾是抗藥最高的蔬菜害蟲，生產(chǎn)防治極其困難。粉虱還能傳播多種由病毒引起的疾病。長期以來依靠化學(xué)農(nóng)藥對它們進行防治，化學(xué)農(nóng)藥污染環(huán)境、使蔬菜中殘留的有害農(nóng)藥增高、也增加了小菜蛾、粉虱等害蟲的抗藥性，使其更難以農(nóng)藥防治。隨著我國菜籃子工程的發(fā)展，設(shè)施蔬菜和無公害蔬菜得到了迅猛發(fā)展，隨之造成粉虱、小菜蛾等害蟲的大量發(fā)生。對蔬菜產(chǎn)生嚴(yán)重的危害，嚴(yán)重威脅到我國綠色無公害蔬菜的生產(chǎn)和人類的健康，嚴(yán)重威脅著我國農(nóng)副產(chǎn)品的出口創(chuàng)匯，所以研究開發(fā)高效無害化防治的新技術(shù)已成為生產(chǎn)上急需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，提供一種對粉虱、小菜蛾和蚜蟲等蔬菜害蟲具有很高防治效果，且對人類和人類生存的環(huán)境沒有任何害處的球孢白僵菌HFW-05菌株及其應(yīng)用。

為完成本發(fā)明的目的，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：一種球孢白僵菌(Beauveriabassiana)HFW-05菌株，保藏號為CGMCC?No.2356。其通過如下方法分離獲得：從保定市郊蕃茄大棚采集煙粉虱尸體，將采集到的煙粉虱尸體分別研磨后，加入到內(nèi)裝50ml無菌生理鹽水和玻璃珠的三角瓶中，在25-27℃，最好為26℃，150-200rpm，最好為150rpm搖床震蕩15分鐘，靜止10分鐘后，在超靜工作臺上取上清液500μl加入4.5ml無菌生理鹽水中，分別取以上懸浮液50μl在由1％的蛋白胨、1％的酵母膏、4％的葡萄糖和2％的瓊脂混合成的SDAY培養(yǎng)基平板上均勻涂板，每處理重復(fù)3次，在25-27℃，最好為26℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5-7d，最好為5d，培養(yǎng)后用無菌牙簽挑取白僵菌菌落，經(jīng)純化后再培養(yǎng)，收集球孢白僵菌孢子粉。以吐溫80作為展著劑用水稀釋制成濃度為1×10⁸孢子/ml菌懸液，以煙粉虱、小菜蛾的若蟲或幼蟲為對象進行生物測定，根據(jù)不同菌株對上述害蟲的毒力效果，最終篩選出了對煙粉虱、小菜蛾高毒力的球孢白僵菌菌株(Beauveria?bassiana)HFW-05。

本菌株已于2008年1月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏號：CGMCC?No.2356。

本發(fā)明還提供了球孢白僵菌HFW-05菌株的發(fā)酵方法和應(yīng)用方法，包括步驟：

1、菌種活化

利用由1％的蛋白胨、1％的酵母膏、4％的葡萄糖和2％的瓊脂混合成的SDAY培養(yǎng)基，將球孢白僵菌菌株HFW-05接種于SDAY培養(yǎng)基面上，保持溫度25-27℃，培養(yǎng)5-7d，生產(chǎn)出活化好的HFW-05的孢子粉。

2、種子液的培養(yǎng)

種子液培養(yǎng)用由1％的蛋白胨、1％的酵母膏和4％的葡萄糖混合成的SDAY液體培養(yǎng)基，在無菌條件下，刮取活化好的HFW-05的孢子粉，用無菌生理鹽水配制成濃度為1×10⁸-5×10⁸孢子/ml的菌懸液，以0.2-0.5％的接種量接種于14升液體發(fā)酵罐中，保持溫度為25-27℃，轉(zhuǎn)速為150-250rpm，培養(yǎng)1d作為種子液。

3、固相發(fā)酵

發(fā)酵培養(yǎng)基為大米，用清水浸泡大米3-4h，撈出控去多余水份，再按1kg大米加入5ml食用油的比例，混勻。

發(fā)酵器具：大小為50×40cm的具有透氣性的塑料袋。

發(fā)酵方法：將上述加入食用油的大米200-300克裝入塑料袋中，用線繩扎緊袋口，裝入滅菌鍋內(nèi)，在121℃下，滅菌30分鐘。在超凈工作臺內(nèi)每袋接入種子液10ml，接種后單鋪放于25-27℃的恒溫室的培養(yǎng)架上，培養(yǎng)5-7d。將上述培養(yǎng)物收集，于室內(nèi)涼干。再用150-200目的振蕩篩收集孢子粉。

4、劑型加工：按照可濕性粉劑的加工方法，將菌孢子粉制成50-100億孢子/克的可濕性粉劑。

5、白僵菌使用方法

防治時期：在煙粉虱、小菜蛾等害蟲的發(fā)生初期進行噴霧防治，對害蟲的棲息、為害的葉背、生長點附近、花等均勻噴灑，每7d噴灑一次，共2-3次；

使用濃度：將每克含白僵菌活孢子50-100億孢子/克的可濕性粉劑，加水稀釋成500-1000倍液，用噴霧器進行噴霧防治。