[其他]胸腺因子Ｄ的制備工藝

在審

• 申請號: 101986000001579
• 申請日: 1986-03-12
• 公開（公告）號: CN86101579B
• 公開（公告）日: 1987-12-09
• 發明（設計）人: 陳紫榕;李龍洋;劉小朋;陳仁英
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍空軍福州醫院
• 代理公司: 福建省專利代理事務所
• 代理人: 林有為;丁秀麗

胸腺因子Ｄ藥物的制備，以動物胸腺組織為原料，通過勻漿、抽提、加熱、透析、滅菌等步驟制成，較其他同類藥物的制備方法簡便。工藝簡單，使用安全，成本低廉，適于工業上大規模生產。本品穩定性好，有效期長，運輸、貯存和使用方便。對急、慢性病毒性肝炎，難治性肺結核、銀屑病、惡性腫瘤和免疫性疾病的療效較其他藥物為優。

本發明屬于胸腺激素藥物的制備工藝。

現有的胸腺激素類藥物，一般以動物的胸腺組織為原料，經過勻漿，用酸性生理鹽水攪拌抽提，過濾或離心去殘渣，把清液pH調至中性，加熱到80℃～90℃，保持15分鐘，而后冷卻，過濾或離心去除雜蛋白，清液用丙酮沉淀，硫酸銨鹽析，再用透析袋或透析紙透析，以去除硫酸銨，再經超濾器超濾，葡聚糖層析等步驟得到較純的物質后，經除菌過濾才能灌封制成。該方法的缺點在于：丙酮沉淀需用大量丙酮，價格昂貴、有毒、不易操作。用透析法去除硫酸銨時，會丟失大量很高生物活性的小分子成分，使最終提取得到的胸腺激素較天然成分相差甚遠，影響醫療效果。此外熱變性時雜蛋白凝固不完全，去除不徹底，需用高速離心機和進口的超濾器等大型設備，工藝復雜，生產周期長，易污染，且超濾時不能解決高分子物質分離的濃差極化問題。再者，整個胸腺激素的制備過程都是在無菌條件下進行的，產品不滅菌，這樣，不僅不易生產，也不利于運輸、貯藏和使用。有些制劑是收集透析外液而制備的，但分子量幾千的部分又被去除，影響生物活性和臨床療效。

本發明的目的在于設計一種工序簡單，成本低廉，活性強，穩定性好的胸腺因子D的制備工藝。

本發明的目的是這樣實現的：首先，與現有技術一樣，經過原料勻漿、抽提、過濾或離心去殘渣，把清液pH調至中性，而后加熱至81℃～121℃，保持10～15分鐘，冷卻。過濾或離心去除雜蛋白。所得清液直接用人工腎透析器透析，將透析液除菌過濾，灌封分裝，加熱滅菌，得到胸腺因子D的滅菌制劑。

采用人工腎透析器，是本發明的主要特征之一：該透析器是上海醫用診察儀器廠從日本硝公司引進全套透析器生產設備，并用進口空心纖維生產的TX-110空心纖維透析器，具有良好的透析和超濾作用（醫療器械1985，9（6）：59），其用途本來是進行血液透析，以去除中、小分子的體內代謝產物和水份，治療尿毒癥性體液潴留、心力衰竭（上海第一醫學院學報1982，9（3）：161）和急、慢性腎功衰竭（中華內科雜志1981，20（6）：326）。后來，又有人用它來回收腹水，以治療肝硬化，難治性腹水（中華內科雜志1984，23（5）：306）。

人工腎透析器的使用方法是已知的，在上述文獻中都有明顯記載。本發明使用該透析器制備胸腺因子D時，將加熱去蛋白后的清液連接上孔，通過中空纖維內腔，上側孔塞住。下側孔接一收集瓶，并連接一吸引器成負壓，保持在100mmHg左右，即可使中、小分子量物質通過中空纖維膜透析和超濾而出，并收集之，而不能透過中空纖維膜的大分子物質仍由內腔通過，從下孔流出而去除之。

采用人工腎透析器，不但省去了傳統方法制備胸腺素的四個程序，即丙酮沉淀，硫酸銨鹽析，超濾器超濾和葡聚糖層析，大大簡化了工藝流程，縮短了生產周期，而且因為該透析器有兩個出口，一個是下側孔，收集了分子量小于15.0Kd的全部有效胸腺激素，另一個是下孔，去除了分子量大于15.0Kd，無明顯活性，易引起過敏反應的全部胸腺激素前體，使產品得率比胸腺肽增加2.5倍，生物活性提高10倍。由于上述透析器的兩條管。使收集和清除得以同時進行，因此解決了高分子物質分離純化的濃差極化問題，在胸腺激素的制備史上是從未有過的。

此外，本發明的另一特征是：在制備工藝中把加熱去蛋白的溫度由80℃提高到90℃。現有技術已經證明，豬胸腺激素F₅在37℃～90℃加熱15分鐘，活性完全不受影響（南京大學學報（自然科學版）1979，(1):121)，但尚無人將其用于胸腺激素的制備工藝中，將加熱溫度提高到90℃，不僅活性不受影響，而且因為溫度提高，可使蛋白凝固完全，便于用普通離心機去除之。