[其他]培養原生質體的方法

在審

• 申請號: 101986000003374
• 申請日: 1986-05-21
• 公開（公告）號: CN86103374B
• 公開（公告）日: 1988-04-06
• 發明（設計）人: 藤村達人;櫻井基
• 申請（專利權）人: 三井東壓化學株式會社
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 羅宏

本文敘述是一種在一液體介質中培養原生質體的方法。按照本發明的方法，原生質體是在厚約１００至４００微米的液體介質層中培養的。

本發明涉及一種培養原生質體的方法。更明確地是本發明涉及在一種液體介質中培養原生質體的方法，利用這種方法從原生質體衍生出一種愈傷組織或細胞簇。

原生質體是植物、細菌、真菌等等的脫去細胞壁的細胞。因為原生質體沒有細胞壁，它易于受到諸如細胞融合、基因控制及人工體細胞突變這樣的人工操作。這樣，假如一種完整植株可由被操作的原生質體再生，那么得到一種具有野生型植物所沒有的有利的特性的植物將是可能的。一種完整植株可由愈傷組織或細胞簇再生，這對許多植物來說都是已知的。這樣，如果一種愈傷組織能由原生質體衍生出來，一株完整植株看來能由愈傷組織再生，依次地能由原生質體再生。

對于象煙草這樣的雙子葉植物，有些技術是已知的，一種完整植株可用這些技術從原生質體再生出來。但對象水稻、小麥和玉米這樣的禾本科植物，據報導僅有玉米和牧草能再生完整植株。至于水稻很少數的技術已有報導如下所述。原生質體的常規培養方法包括把原生質體埋在半固體瓊脂介質中，把原生質體懸浮在液體介質中以及用喂養細胞來培養原生質體的原生質體培養法。但是，已經發現這些技術對培養其它植物象水稻、小麥和玉米的禾本科植物常常沒有什么效果。例如，如果水稻的原生質體用這些方法中的一種來培養，原生質體就死亡或不生長。

至于水稻的原生質體的培養技術已有報導，由缺乏其硝酸鹽還原酶的細胞得到的一種原生質體衍生出來一個愈傷組織（Wakasa等，J.Plant Physiol，117，PP223～231（1984）），一個苗是由一種愈傷組織再生來的，這種愈傷組織是由花粉的愈傷組織得到的原生質體衍生來的（Ohno等，Japanese Journal Of Breeding 35：PP54-55（1985））。然而，這些技術利用從特定的愈傷組織釋放出的原生質體，而且這些技術并不是對從各種愈傷組織或組織釋放的各種原生質體都適用的。換言之，這些技術并不是對大多數種類的原生質體都有重復性。

另一方面，許多研究人員已報導了完整植株已從水稻的培養細胞再生出來的技術（Nishi等人，Nature 219：PP.508-509（1968））。然而這些技術并不使用原生質體。此外，已經發現從在這些技術中所使用的具有高度分化能力的細胞得到一種原生質體是困難的，而且培養這種原生質體也是困難的。

這樣，就需要建立一種從原生質體衍生一種愈傷組織或細胞簇的培養原生質體的方法，這種方法對于來源于一種植物的一般的或非特異的細胞的原生質體是有重復性的和可應用的。

因此，本發明的目的是根供一種由原生質體衍生出細胞簇或愈傷組織的培養原生質體的方法，這種方法對于那些從一種植物的普通的或非特異細胞產生的原生質體是有重復性的和可應用的。

在本發明的方法中，原生質體是在一層100到400微米厚的液體介質中培養的。用本方法，原生質體是在稍微有氧條件下培養的。本發明人已經發現這種有氧條件促進了原生質體的生長。

根據本發明的方法，不僅是雙子葉植物的原生質體，甚至單子葉植物的原生質體也能很好地生長而形成愈傷組織或細胞簇。