[發(fā)明專利]一種用于蛋白、血清溶液的除菌和凈化的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110263202.1
• 申請日: 2011-09-07
• 公開（公告）號: CN102974217A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳霆;蔣平;朱棣;吳杰
• 申請（專利權(quán)）人: 陳霆
• 主分類號: B01D61/00
• 分類號: B01D61/00;B01D65/02
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務(wù)所 32237
• 代理人: 黃振華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種殺菌凈化方法，特別是一種用于蛋白、血清溶液的除菌和凈化的方法。

背景技術(shù)

用物理或化學(xué)等方法殺滅或除去所有致病和非致病微生物的繁殖體和芽胞的手段稱為滅菌。藥劑學(xué)中滅菌可分為三種：物理滅菌法、化學(xué)滅菌法和無菌操作法。物理滅菌法主要有熱滅菌法、射線滅菌法和過濾滅菌法；化學(xué)滅菌法有氣體滅菌法和化學(xué)藥劑滅菌法，主要適用于醫(yī)用器具、設(shè)備和設(shè)施的消毒。滅菌方法的選擇應(yīng)兼顧藥物的化學(xué)穩(wěn)定性、制劑的物理化學(xué)穩(wěn)定性。蛋白、血清溶液由于其為溶液，且具有遇熱、射線不穩(wěn)定的特性，一般采用物理滅菌法中的過濾滅菌法。過濾滅菌法是使藥物溶液通過無菌的特定濾器，除去活的或死的微生物而得到不含微生物的濾液。研究發(fā)現(xiàn)，繁殖型細菌大小一般大于1μm，而芽孢大于0.5μm。

目前，市場上血清蛋白的滅菌過濾器濾膜孔徑多采用0.2μm，但存在濾速與滅菌率相矛盾的現(xiàn)象。一般情況下，濾膜孔徑越大，濾速越快，但同時由于濾膜孔徑大，細菌的滅菌率會降低。如在0.1MPa氣壓下，將血清蛋白通過孔徑為0.2μm的聚醚砜微孔過濾器發(fā)現(xiàn)，10min通過的血清蛋白體積為47L，濾速為282l/h。采用中國藥典無菌檢查法測得滅菌率為99.995%。同時在0.1MPa氣壓下，將血清蛋白通過孔徑為1.2μm的聚醚砜微孔過濾器發(fā)現(xiàn)，10min通過的血清蛋白體積為85L，濾速為510l/h。采用中國藥典無菌檢查法測得滅菌率為96.875%，達不到高端領(lǐng)域的滅菌要求。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明公開了一種能夠處理不同情況的蛋白、血清溶液的除菌和凈化的方法。

技術(shù)方案：本發(fā)明公開了一種用于蛋白、血清溶液的除菌和凈化的方法，包括以下步驟：

1）制定1個緊密排列的折疊式過濾器，其中上游濾膜孔徑0.45-1.2μm，下游濾膜孔徑為0.2μm；

2）取血清蛋白，在輸入壓為0.1MPa條件下，將血清蛋白通過上述折疊式過濾器；

3）通過公式測定10min時間內(nèi)折疊式過濾器內(nèi)通過的牛血清蛋白體積來計算濾速；

4）分析牛血清蛋白通過折疊式過濾器后的滅菌率；

5）采用121度蒸汽消毒方法對折疊式過濾器進行30分鐘的消毒滅菌；

6）重復(fù)步驟2至步驟5過程，測定過濾器的有效使用次數(shù)，有效使用次數(shù)以最后一次仍能達到有效滅菌率(99.99%以上)為止。

步驟1所述的折疊式過濾器濾膜材質(zhì)采用聚醚砜，對溶液沒有影響，使用過程中存在問題少，因此微孔濾膜是目前應(yīng)用最廣泛的無菌過濾介質(zhì)，且已成為制備無菌溶液的基本工具。微孔濾膜的材質(zhì)主要有醋酸纖維素脂、硝酸纖維素脂、聚醚砜以及混合材料。

聚醚砜化學(xué)結(jié)構(gòu)式：????????????????????????????????????????????????，分子結(jié)構(gòu)中既不含熱穩(wěn)定性較差的脂肪烴鏈節(jié)，又不含剛性大的聯(lián)苯鏈節(jié)，而主要由砜基、醚基和次苯基組成。砜基附予耐熱性；醚基使聚合物鏈節(jié)在熔融狀態(tài)時具有良好的流動性，易于成型加工；在對苯撐結(jié)構(gòu)上交替連結(jié)砜基和醚基能得到非結(jié)晶性的聚合物。聚醚砜膜具有耐熱等級高、機械性能好，尺寸穩(wěn)定、耐化學(xué)藥品性、耐熱水、耐水解性、阻燃性的特點。鑒于聚醚砜的化學(xué)特性，本發(fā)明濾膜材質(zhì)采用聚醚砜。

步驟2中所述血清蛋白為分子量為67000的牛血清蛋白。

步驟3所述公式為：濾速(l/h)=牛血清蛋白體積/10min。

步驟4所述滅菌率的分析采用中國藥典無菌檢查法測定。

無菌檢測方法如下：

一、培養(yǎng)基的配制及接種

(1)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的配制：酪胨(胰酶水解)15.0g，酵母浸出粉5.0g，葡萄糖5.0g，氯化鈉2.5g，L-胱氨酸0.5g，新配制的0.1%刃天青溶液1.0ml，硫乙醇酸鈉0.5g，瓊脂0.75g(或硫乙醇酸，0.3ml)，水1000ml。除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.1±0.2。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的1/2。滅菌后置30℃～35℃培養(yǎng)。