[發明專利]快速檢測和判斷白蛋白制品分析方法

在審

• 申請號: 201210097367.0
• 申請日: 2012-04-05
• 公開（公告）號: CN103364389A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 楊永健;毛丹卓;翁欣欣;王彥
• 申請（專利權）人: 上海市食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 北京市漢信律師事務所 11373
• 代理人: 王文生

技術領域

本發明涉及一種白蛋白制品的無損快速檢測方法，特別地涉及一種采用白蛋白的特征譜段來預測白蛋白濃度并進一步鑒別白蛋白制品，特別是人血白蛋白制品的真假偽劣的分析方法。

背景技術

人血白蛋白溶液為澄清、略黏稠的液體，幾乎無色，或黃色、棕黃色或綠色，源于人靜脈血漿，經過一系列沉淀、離心、過濾、滅菌等步驟制備而成。該藥一直有“生命制品”、“救命藥”之稱，主要用于治療血容擴張不足引起的急性和重癥監護病人，包括營養不良、燒傷、嚴重損傷、感染、大手術、出血、腎排泄過度、胰腺炎、妊娠中毒、新生兒高膽紅素血癥、肝硬化及腎病引起的水腫或腹水，癌癥術后恢復等方面的治療，是臨床急救的一種特殊藥品。其應用較為廣泛，屬于市場上的緊俏藥品。人血白蛋白溶液的供應緊張情況在國內已持續了兩年有余，如今更有愈演愈烈之勢。因而有不法分子唯利是圖，制售假劣人血白蛋白溶液，坑害廣大患者，擾亂醫藥市場。

人血白蛋白溶液制假主要有兩種情況：一、不含人血白蛋白；二、人血白蛋白的真實含量低于樣品包裝上所標示的含量。

出于基層打假經常性的大范圍篩查樣品的需求，需要有一些準確、快速、簡便的方法。近幾年來，在分析過程中不對樣品造成化學的、機械的、光化學和熱分解的分析手段，是分析科學領域的研究熱點之一。隨著化學計量學的發展，光譜法受到國內外廣泛的重視：近紅外光譜重疊嚴重，對很多藥品的測定精度不夠理想；紅外光譜法對測試環境溫濕度要求相當高，樣品制作也較麻煩，檢測周期較長，不能滿足快速檢驗的要求；拉曼光譜技術具有化學分子的指紋辨識、快速、無需繁雜的樣品前處理、無損檢測、不受水分子干擾等優點，適用于假藥的檢測，可用于人血白蛋白的真假偽劣鑒別。目前各種人血白蛋白溶液質量標準均使用中國藥典附錄蛋白質測定法第一法，也就是傳統的凱氏定氮法進行蛋白質含量測定，操作較繁瑣耗時，在應用于快速檢測時存在一些不足之處。有文獻報導，采用拉曼光譜法對人血白蛋白溶液進行定性分析鑒別，但是至今沒有對人血白蛋白進行含量測定的相關報導。采用拉曼光譜進行定量分析，需要消除測定中的不穩定性，一方面消除隨機噪聲、樣品背景干擾、測樣器件引起光譜差異等因素對校正結果產生的影響；另一方面是譜圖信息的優化，對樣品信息突出的光譜區域進行選擇，篩選出最有效的光譜區域，提高運算效率。目前，還沒有對人血白蛋白溶液的拉曼光譜定量分析的研究報道。

因此，如何在人力、試驗場地、試驗儀器等均有限的條件下，采用拉曼光譜儀，發展準確、易用的拉曼光譜信息處理方法，從而有效且準確地對人血白蛋白實現無損、低成本、簡便、快速、易于普及推廣的人血白蛋白快速檢測，從而達到對人血白蛋白真偽假劣問題的及時發現和監控管理，已成為眾多科研、藥檢人員關注的重點之一。

發明內容

為了解決本領域的上述問題，本發明提供了一種新穎的預測白蛋白濃度并進一步鑒別白蛋白制品的真假偽劣的方法，該方法對樣品測得的拉曼光譜進行平滑濾波消除噪聲干擾、二階導數處理、定量回歸分析，然后通過內部交叉驗證法建立模型。

因此，在第一個方面，本發明提供了一種預測待測樣品的白蛋白濃度的方法，該方法包括以下的步驟：

1)獲取白蛋白標準品的拉曼光譜圖：將n個系列濃度的白蛋白標準溶液作為定標樣品，通過拉曼光譜儀獲得所述n個定標樣品的拉曼光譜圖；

2)選取特征譜段：從步驟1)獲得的n個定標樣品的拉曼光譜圖中選取與芳香族氨基酸苯環上C＝C對稱伸縮振動相對應的拉曼峰范圍作為特征譜段，所述特征譜段優選為960-1100cm^-1；

3)Savitsky-Golay(下面簡稱S-G)平滑處理：將從每個濃度的標準溶液的拉曼光譜圖中所選取的上述特征譜段的數據進行多點(優選9～21點，更優選9～17點，最優選13～17點，可具體選擇9點、13點、15點和17點，優選13點和17點，最優選17點)Savitsky-Golay平滑濾波消除噪聲干擾；

4)二階導數處理：對步驟3)獲得的數據進行二階導數處理；

5)偏最小二乘法定量(PLS)回歸分析：將步驟4)獲得的光譜數據中n個定標樣品的光譜矩陣和濃度矩陣進行偏最小二乘法定量回歸分析，并計算出每個定標樣品的預測濃度；

6)交叉驗證：對步驟5)中獲得的每個定標樣品的預測濃度通過F-檢驗進行交叉驗證，獲得在所述交叉驗證中達到最優主因子數時以真實濃度為橫坐標，預測濃度為縱坐標的所述特征譜段的標準曲線，由此建立白蛋白的偏最小二乘法模型；