[發明專利]一種從聚丙烯酰胺凝膠中回收核酸分子的方法

無效

• 申請號: 201210249368.2
• 申請日: 2012-07-18
• 公開（公告）號: CN102796730A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: 彭海;張靜;周俊飛
• 申請（專利權）人: 海南廣陵高科實業有限公司;江漢大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京三高永信知識產權代理有限責任公司 11138
• 代理人: 孟阿妮

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，公開了一種從聚丙烯酰胺凝膠中回收核酸分子的方法。

背景技術

凝膠電泳是分離目標核酸分子的經典方案，其原理在電場牽引力作用下，不同分子量的核酸分子運動速度不一樣，從而將它們分離開來。凝膠電泳分為瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE），前者回收相對簡單，但分辨力有限，后者分辨率可達1個堿基差異，但由于PAGE膠中核酸難以溶解出來，回收較為困難。與瓊脂糖膠回收方案比較，PAGE膠回收存在的問題如下：（1）膠破碎操作困難；（2）需要在較高溫度（60度左右）操作4小時以上才能將核酸從破碎的PAGE膠中將溶解出來，顯著延長了操作時間，長時間高溫處理也增加了核酸降解的風險；（3）成本是瓊脂糖回收的3倍左右；（4）回收效率低于瓊脂糖電泳回收。

發明內容

本發明實施例的目的是針對上述現有技術的缺陷，提供一種回收的操作時間短，且回收成本低的從聚丙烯酰胺凝膠中回收核酸分子的方法。

為了實現上述目的本發明采取的技術方案是：

一種從聚丙烯酰胺凝膠中回收核酸分子的方法，包括以下步驟：

（1）從聚丙烯酰胺凝膠中分離核酸；

（2）切下含有目標核酸分子的聚丙烯酰胺膠；

（3）將切下的聚丙烯酰胺膠放在瓊脂糖膠孔中電泳并顯色；

（4）從瓊脂糖膠中切膠并回收目標核酸分子。

本發明更優選的技術方案:一種從聚丙烯酰胺凝膠中回收核酸分子的方法，包括以下步驟：

（1）聚丙烯酰胺凝膠分離核酸：根據需要分離的核酸分子預期的分子量大小，配制相應濃度的聚丙烯酰胺凝膠，在不高于5V/cM的電壓下電泳3-10分鐘，使不同分子量的核酸分子分離后顯色；

（2）切下含有目標核酸分子的聚丙烯酰胺膠：根據所需要的核酸分子大小范圍，切下含有目標分子的聚丙烯酰胺膠膠塊；

（3）將切下的聚丙烯酰胺膠放在瓊脂糖電泳膠孔中電泳并顯色：根據切下聚丙烯酰胺膠塊中的核酸分子量的大小，配制相應濃度的瓊脂糖凝膠，將切下的聚丙烯酰胺膠膠塊置于瓊脂糖凝膠的點樣孔中，在不高于5V/cM的電壓下電泳3-10分鐘后顯色；

（4）從瓊脂糖膠中切膠并回收目標核酸分子：在激發光照射下，切下含有核酸分子的瓊脂糖膠塊，按瓊脂糖凝膠回收方案回收目標核酸分子。

本發明實施例提供的技術方案帶來的有益效果是：

（1）快捷：利用PAGE膠回收，大量時間耗在膠破碎與膠溶解上，至少要4.5小時以上，利用本發明的技術方案，省略了膠破碎與膠溶解，大約只需要0.5小時左右；

（2）便宜：本發明最終采用瓊脂糖回收試劑盒,比PAGE膠回收試劑盒價格便宜3倍左右，回收成本低；

（3）方便：本發明避免了破碎PAGE膠的麻煩；

（4）高效：本發明最終是從瓊脂糖膠中回收核酸，因此高于PAGE膠回收效率，回收效率高；

（5）安全：本膠發明避免了長時間高溫從破碎PAGE中溶解出核酸的程序，因而避免了核酸降解的風險，更為安全。

附圖說明

圖1是本發明實施例提供的從聚丙烯酰胺凝膠中回收核酸分子方法流程示意圖；

圖2是本發明實施例提供的從20bp?Marker中回收100bp與小RNA文庫中回收100-140bp的DNA分子的流程示意圖；

圖3a和圖3b是本發明實施例提供的PAGE膠與瓊脂糖膠電泳結果圖。

圖3a和圖3b中：a:PAGE電泳；b:瓊脂糖電泳；1，3：20bp?Marker；2:小RNA文庫；4：從PAGE膠20bp?Marker中切取100bp的分子后瓊脂糖電泳結果；5：從PAGE膠小RNA文庫中切取100-140bp的分子后瓊脂糖電泳結果。

具體實施方式

為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面對本發明實施方式作進一步地詳細描述。

參見圖1，一種從聚丙烯酰胺凝膠中回收核酸分子的方法，包括以下步驟：

（1）從聚丙烯酰胺凝膠中分離核酸：根據需要分離的核酸分子預期的分子量大小，配制相應濃度的聚丙烯酰胺凝膠，在不高于5V/cM的電壓下電泳3-10分鐘，使不同分子量的核酸分子分離后PAGE膠顯色；

（2）切下含有目標核酸分子的PAGE膠膠塊：根據所需要的核酸分子大小范圍，切下含有目標分子的PAGE膠膠塊；