[發明專利]一種超靈敏檢測小分子物質的方法

在審

• 申請號: 201811189916.0
• 申請日: 2018-10-12
• 公開（公告）號: CN109164255A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發明（設計）人: 王軍;王旭
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/543;G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

本發明提供一種超靈敏檢測小分子物質的方法，屬于生物技術領域。該方法中待檢小分子物質為抗原、配體、生物素、底物和多糖中的一種或兩種以上,包括如下步驟：分別采用各待檢測小分子標記固相載體；分別采用各熒光探針標記通過特異性作用識別所述各待檢測小分子的物質，獲得熒光標記物；將各待檢測小分子標記的固相載體和各熒光標記物加入樣品溶液中進行反應；反應結束后，分離固相載體，釋放固相載體表面結合的熒光探針；采用單分子檢測方法檢測所述熒光探針，根據標準工作曲線，計算樣品溶液中各待測小分子濃度。本發明超靈敏檢測小分子物質的方法，可以快速、高靈敏度的檢測多種小分子物質。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種超靈敏檢測小分子物質的方法。

背景技術

免疫檢測通常是指通過抗體與抗原的特異性識別而用抗體(或抗原)來檢測抗原(或抗體)的檢測方法。這種通過特異性相互識別的檢測方法也可以推廣到其它物質的檢測，如受體與配體，酶與底物，凝集素與多糖。免疫檢測的最經典方法是酶聯免疫吸附法(ELISA)。ELISA簡單、經濟，而且已廣泛采用自動化操作，但是ELISA存在一定的局限性：一是靈敏度低，二是無法進行多重檢測。

發明內容

本發明的目的是提供一種超靈敏檢測小分子物質的方法，可以快速、高靈敏度的檢測小分子物質。

本發明的目的采用如下技術方案實現。

一種超靈敏檢測小分子物質的方法，待檢小分子物質為抗原、配體、生物素、底物和多糖中的一種或兩種以上,包括如下步驟：

(1)分別采用各待檢測小分子標記固相載體；分別采用各熒光探針標記通過特異性作用識別所述各待檢測小分子的物質，獲得熒光標記物；

(2)將各待檢測小分子標記的固相載體和各熒光標記物加入樣品溶液中進行反應；

(3)反應結束后，分離固相載體，釋放固相載體表面結合的熒光探針；

(4)采用單分子檢測方法檢測所述熒光探針，根據標準工作曲線，計算樣品溶液中各待測小分子濃度。

在本發明中，當所述待檢小分子為抗原時，通過特異性作用識別待檢測小分子的物質為抗體；當所述待檢小分子為配體時，通過特異性作用識別所述待檢測小分子的物質為受體；當所述待檢小分子為底物時，通過特異性作用識別所述待檢測小分子的物質為酶；當所述待檢小分子為多糖時，通過特異性作用識別所述待檢測小分子的物質為凝集素；當所述待檢小分子為生物素時，通過特異性作用識別所述待檢測小分子的物質為親和素或鏈霉親和素。

優選的技術方案中，所述固相載體為高吸附微孔板、磁珠、聚苯乙烯微球、乳膠微球、碳納米管或金屬納米顆粒。

在本發明中，通過共價或非共價的方式將各待檢測小分子標記在固相載體表面、將熒光探針標記通過特異性作用識別各待檢測小分子的物質；所述共價方式包括通過活化羧基與氨基反應、點化學反應、醛基與氨基反應或巰基與馬來酰亞胺反應；所述非共價方式為通過物理吸附或通過生物素與親和素相互作用。

優選的技術方案中，通過加入釋放緩沖液或者加熱的方法釋放固相載體表面結合的熒光探針或者通過使用巰基化合物切斷二硫鍵、高碘酸鈉氧化切斷鄰位二羥基或光切割鄰位硝基苯衍生物的方法釋放固相載體表面結合的熒光探針。

在本發明中，所述標準工作曲線的自變量為各待檢小分子的濃度，因變量為檢測信號值。

優選的技術方案中，步驟(2)的反應體系中標記在固相載體表面的待檢測小分子的終濃度為0.1pg/mL-1mg/mL，熒光標記物的終濃度為0.1pg/mL-1mg/mL,所述反應體系是將各待檢測小分子標記的固相載體和各熒光標記物加入樣品溶液后形成的。

優選的技術方案中，所述小分子物質為黃曲霉毒素B1。

本發明的有益效果：