[發(fā)明專利]在豬骨骼肌成肌細胞中過表達IL-15的方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110066701.5
• 申請日: 2021-01-19
• 公開（公告）號: CN112680478A
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郝月;顧憲紅;邢明杰
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N5/10
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11562
• 代理人: 王穎

本發(fā)明公開了在豬骨骼肌成肌細胞中過表達IL?15的方法及其應(yīng)用，屬于基因工程領(lǐng)域。本發(fā)明通過將豬IL?15基因轉(zhuǎn)入到慢病毒載體中再將慢病毒載體轉(zhuǎn)入豬骨骼肌成肌細胞中，成功使IL?15在豬骨骼肌成肌細胞中過表達。本發(fā)明提供的過表達IL?15的方法解決了傳統(tǒng)研究過程中IL?15需要多次添加，步驟繁瑣的問題。本發(fā)明證明了IL?15過表達對豬骨骼肌成肌細胞的分裂增殖、細胞凋亡、抗氧化損傷能力的調(diào)控作用，為IL?15的進一步研究指明了方向。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，特別是涉及在豬骨骼肌成肌細胞中過表達IL-15的方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著我國畜牧業(yè)特別是現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)集約化程度的提高，豬在生長、肥育和屠宰期間受到越來越多應(yīng)激因素的影響，引起機體營養(yǎng)物質(zhì)分配和自由基代謝的變化。應(yīng)激會打破機體氧化與抗氧化的平衡，導(dǎo)致體內(nèi)自由基急劇增加，使機體許多重要的生物大分子發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的氧化損傷，導(dǎo)致細胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，最終影響動物健康及肉品質(zhì)(Kerth，2013)。

白細胞介素15(interleukin-15，IL-15)是1994年發(fā)現(xiàn)的一種多效性細胞因子，能夠調(diào)控多種細胞的增殖、分化、維持以及分泌活動[2]。IL-15也是骨骼肌分泌的一類重要肌肉因子，在調(diào)節(jié)骨骼肌代謝和能量平衡方面發(fā)揮著重要作用。它能以內(nèi)分泌和旁分泌的方式調(diào)節(jié)肌肉和脂肪組織的代謝，從而維持整個機體的穩(wěn)態(tài)。對IL-15的研究越來越熱門，但先前的研究多采用直接添加IL-15的方法來增加其在細胞中的表達，由于IL-15的半衰期很短，單次處理很難達到理想效果，因此需要多次添加，操作繁瑣，且增加了研究成本。并且尚未有IL-15對豬骨骼肌成肌細胞的影響的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供在豬骨骼肌成肌細胞中過表達IL-15的方法及其應(yīng)用，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，在豬骨骼肌成肌細胞中過表達IL-15，降低了研究成本，簡化了操作步驟。本發(fā)明證明了IL-15過表達對豬骨骼肌成肌細胞的細胞周期、凋亡率等具有調(diào)控作用，為進一步研究IL-15對畜禽肉的影響奠定了基礎(chǔ)。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

第一方面，提供了一種在豬骨骼肌成肌細胞中過表達IL-15的方法，先將IL-15轉(zhuǎn)入慢病毒載體中，再將慢病毒載體轉(zhuǎn)入豬骨骼肌成肌細胞中使豬骨骼肌成肌細胞過表達IL-15。

優(yōu)選的，所述的慢病毒載體為GV492慢病毒表達載體。

第二方面，提供了IL-15過表達在降低豬骨骼肌成肌細胞凋亡中的應(yīng)用。

第三方面，提供了IL-15過表達在增強豬骨骼肌成肌細胞抗氧化損傷能力中的應(yīng)用。

第四方面，提供了IL-15過表達在促進豬骨骼肌成肌細胞的分裂增殖中的應(yīng)用。

本發(fā)明公開了以下技術(shù)效果：

本發(fā)明提供在豬骨骼肌成肌細胞中過表達IL-15的方法及其應(yīng)用。本發(fā)明利用慢病毒載體將豬IL-15基因轉(zhuǎn)入豬骨骼肌成肌細胞中，并通過檢測mRNA和蛋白表達量證明IL-15能夠在豬骨骼肌成肌細胞中過表達。本發(fā)明直接在豬骨骼肌成肌細胞中過表達IL-15基因，解決了之前的研究中IL-15處理需要多次添加、操作繁瑣的問題，并且為后續(xù)進一步研究IL-15對肉類的影響奠定了基礎(chǔ)。

本發(fā)明通過實驗證明了IL-15能夠促進豬骨骼肌的分裂增殖，能夠增強其抗氧化損傷能力及降低細胞凋亡率。提供了IL-15過表達的應(yīng)用，為后續(xù)進一步的研究指明了方向。

附圖說明

圖1為實施例1中GV492載體圖譜；