[發明專利]人NT-proBNP特異性單克隆抗體制備方法和應用

在審

• 申請號: 202310576732.4
• 申請日: 2023-05-22
• 公開（公告）號: CN116535504A
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發明（設計）人: 溫志剛;林朝喜
• 申請（專利權）人: 深圳市睿盟創新生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/26
• 分類號: C07K16/26;C12N5/20;C12N15/13;G01N33/74;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 王秉麗

本發明涉及一種人NT?proBNP特異性單克隆抗體制備方法和應用。單克隆抗體具有抗原結合結構域，所述抗原結合結構域能夠特異性結合NT?proBNP的第66至76位氨基酸區域且不能結合proBNP，或者所述抗原結合結構域能夠特異性結合NT?proBNP的第5至27位氨基酸區域且還能特異性結合proBNP。相對于傳統技術，本申請的有益效果包括：本申請提供的結合蛋白，其具有能夠特異性結合NT?ProBNP合適區域的抗原結構域，能用于準確檢測出樣品中的NT?proBNP或者NT?proBNP和proBNP。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種人NT-proBNP特異性單克隆抗體制備方法和應用。

背景技術

B型利鈉肽(B-type?natriuretic?peptide，BNP)及其無活性同源片段—N末端B型利鈉肽前體(N-terminal?pro-B-type?natriuretic?peptide，NT-proBNP)是利鈉肽(natriuretic?peptides，NPs)家族中的一員。

人BNP編碼基因(NPPB)的初始表達產物是proBNP前體(precursor?pro-B-typenatriuretic?peptide，pre-proBNP)，被信號肽酶剪切掉N端26個氨基酸成為proBNP，proBNP進一步被蛋白水解酶裂解為等摩爾兩部分，并分泌到外周循環中：N端無生物學活性的直鏈NT-proBNP，即NT-proBNP1～76；C端具有生物學活性的環狀BNP，即BNP1～32。NT-proBNP在體內的半衰期為90min，而BNP的半衰期僅有20min。

健康狀態下，ANP是外周循環中主要的NPs，BNP濃度僅為ANP的1/10左右。而在缺血、應激及心室容積壓力增大等病理狀態下，BNP合成釋放顯著增加，成為外周循環中主要的NPs，如心衰患者BNP或/和NT-proBNP水平升高200～300倍，甚至更高。健康個體和患者間BNP或/和NT-proBNP水平的巨大差異使其成為心臟功能的理想指標。實際上，BNP已經在臨床上應用超過20年，對疑似心力衰竭(簡稱：心衰)的診斷和預后評估具有重要價值，被多個臨床實踐指南作為Ⅰ級推薦。目前，NT-proBNP是心衰診斷與鑒別診斷的首選生物標志物，可以幫助臨床醫生管理心衰患者，既能用于心衰一級與二級預防，又可評估心衰患者的病情嚴重程度及預后，還可用于肺動脈高壓、肺栓塞、冠心病及慢性腎病等患者的預后評估，亦用于非心臟手術患者術前及腫瘤患者化療前的心血管風險評估。此外，BNP或/和NT-proBNP還可用于心血管疾病的一級預防。然而，BNP代謝過程復雜、檢測結果影響因素眾多，臨床上BNP或/和NT-proBNP的檢測結果應在特定臨床背景下進行解釋。

絕大多數NT-proBNP檢測方法(包括商業化的檢測方法)采用相同的抗體和校準品，但不同平臺間仍有8％～23％的差異。NT-proBNP檢測與proBNP存在交叉，但不與BNP交叉。這類檢測方法檢測的物質為NT-proBNP和proBNP混合物。并且，糖基化修飾對于識別NT-proBNP中心區的檢測方法有負性影響，這類方法學僅能識別非糖基化的NT-proBNP和proBNP，但是無法識別糖基化的NT-proBNP和proBNP，可能導致NT-proBNP和proBNP真實水平被低估。如何實現NT-proBNP或其與proBNP的真實水平的檢測，是亟待解決的技術問題。

發明內容

本申請實施例的主要目的包括提供一種單克隆抗體，其能特異性結合NT-proBNP或其與proBNP，采用該單克隆抗體對樣品中的NT-proBNP或其與proBNP進行檢測，能準確反映樣品中NT-proBNP或其與proBNP的真實水平。

本申請的技術方案包括：

在本申請的第一方面，提供一種結合蛋白，其具有抗原結合結構域，所述抗原結合結構域能夠特異性結合NT-proBNP的第66至76位氨基酸區域且不能結合proBNP，或者所述抗原結合結構域能夠特異性結合NT-proBNP的第5至27位氨基酸區域且還能特異性結合proBNP。