[其他]載體

無效

• 申請號: 85101291
• 申請日: 1985-04-01
• 公開（公告）號: CN85101291A
• 公開（公告）日: 1987-04-22
• 發明（設計）人: 中川幸光;宇野修正;永井正德;有村博文
• 申請（專利權）人: 綠十字株式會社
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 顧柏棣,辛敏忠

本發明涉及一種新穎載體。更為特殊的是，發明所涉及的這種載體，其特征是至少含有一個啟動基因區，此啟動基因區出現在兩個限制性內切酶斷裂位置之間，而這兩個位置分別地為兩種不同的限制性內切酶所識別，但在斷裂處卻給出了兩個相同的粘性末端。

這種啟動基因是一種調節因子，它控制著由RNA所提供的遺傳信息。其作用相當于是一個被RNA聚合酶所識別的位置，相當于是一個RNA聚合酶聯接的位置，和相當于RNA合成的起始點，在蛋白質的合成中起非常重要的作用。

Lac啟動基因、trp啟動基因和β-內酰胺酶啟動基因是人們所熟知的啟動基因，它們在宿主大腸桿菌（Escherichiacoli）中的表型表達具有顯著的功效。

在探索一種更有效的啟動基因的研究中，一直在尋找這樣的啟動子并創造了雜種啟動基因。例如，tac啟動基因是由trp啟動基因和Lac啟動基因所組成。這是人們所熟知的雜種啟動基因。

對于以酵母為宿主的啟動基因來說，被提到的有PGK啟動基因、ADH啟動基因和phoE啟動基因。

在探尋一種更有效的啟動基因中，本發明人將研究引導到那些各包括有眾多的系列啟動基因的各種啟動基因中去。

研究結果，他們發現，提供了這樣一種載體，即其上有一個啟動區，該區在兩種限制性內切酶分別識別的切點之間，而又在兩個切點上分別形成相同的粘性末端，那么，就能造出一系列的含有眾多啟動子的載體。目前，本發明已經完成了。

所以，本發明所涉及的是這樣的載體，其特征是在兩個限制性內切酶斷裂位置之間至少出現一個啟動基因區，而這兩個位置分別地為兩種不同的限制性內切酶所識別，而在斷裂處卻給出兩個相同的粘性末端。

在附圖中，

圖1表示了pDR540和由此衍生得到的pTL1，后者對于多重tac啟動基因來說是一種基本質粒;

圖2表示了從pTL1構成多重tac啟動基因的示意圖;

圖3表示了多重tac啟動基因的構成示意圖;

圖4指出了pYN1的限制性內切酶斷裂位置;

圖5表示了pYN1的trp啟動基因/操縱基因區的，以及圍繞它們的DNA序列;

圖6指出了pYN3的trp啟動基因/操縱基因區內部和周圍的限制性內切酶斷裂位置;

圖7指出了pYN4的限制性內切酶斷裂位置;

圖8指出了pYN6的限制性內切酶斷裂位置;

圖9表示了在pYN6的trp啟動基因/操縱基因區中的DNA序列;

圖10指出了pYN8、pYN9和pYN10的限制性內切酶斷裂位置;

圖11表示了pYN20的制備示意圖，pYN20通過SalⅠ和XhoⅠ位置用以制備多重trp啟動基因;

圖12指出了從pYN20制備pYN21的示意圖，pYN21起著多重trp啟動基因的基本構成的作用;

圖13指出了利用SalⅠ和XhoⅠ位置制備雙重和三重trp啟動基因的示意圖。

按本發明所述，“具有相同的粘性末端”意味著在限制性內切酶斷裂處出現單股斷裂的那些部分具有相同的堿基序列。例如，BglⅡ判別序列是

5′-AGATCT-3′

3′-TCTAGA-5′

在斷裂處，5′-GATC-3′成為粘性末端。另一方面，BamHⅠ識別序列是

5′-GGATCC-3′

3′-CCTAGG-5′

在斷裂處，5′-GATC-3′成為粘性末端。其他限制性內切酶結合位置是SalⅠ與XhoⅠ和BamHⅠ與BclⅠ，這些結合位置也給出相同的粘性末端。

上述事實使兩端可能發生連接（以下稱為“連接”-Ligation）。此連接位置不可能再被前邊所用的兩種酶所斷裂，這是因為這兩個酶的識別位置之間有差別。利用這一特性，就可能制備多重啟動基因。例如，BamHⅠ和BglⅡ粘性末端彼此連接時，就得到下面的序列。

5′-GGATCT-3′

3′-CCTAGA-5′

這樣，在這一MboⅠ斷裂位置上不再能夠用BamHⅠ或BglⅡ斷裂了。

SalⅠ和XhoⅠ粘性末端彼此連接時，就得到下面的序列。

5′-GTCGAG-3′

3′-CAGCTC-5′

這一序列是TaqⅠ斷裂位置，所以不再能夠被SalⅠ或XhoⅠ斷裂了。

根據本發明，一個操縱基因和一個SD序列可以與兩個不同的限制性內切酶的識別位置之間的啟動基因一起存在。