[其他]微生物細胞的固定化方法

無效

• 申請號: 85102838
• 申請日: 1985-04-01
• 公開（公告）號: CN85102838A
• 公開（公告）日: 1986-09-10
• 發明（設計）人: 李有福;張坐奎;張叔淵
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C12N11/08
• 分類號: C12N11/08;//;C12R119)
• 代理公司: 四川大學專利事務所
• 代理人: 劉金蓉,陳智倫

本發明涉及一種微生物細胞的固定化方法。

以前的微生物細胞固定化方法一般是用膠類作為載體。例如明膠、瓊脂、果膠、海藻膠等。中國科學院微生物研究所等單位制備的生產6-氨基青霉素烷酸（簡稱6-APA）的固定化大腸桿菌細胞，就是采用瓊脂作載體，結合戊二醛處理的方法，如《微生物學報》1980年20卷4期文章所述。該方法最大的缺點是所得的固定化細胞酶活性低，只有2u/克固胞。因而應用于生產時效率低，直接影響到生產6-APA的產量及質量，并且其固定化細胞的機械強度較差，降低了使用效果和壽命。

近年來有人提出用聚乙烯醇（PVA）作為載體固定微生物細胞制備酒精，例如日本特許出愿公開昭57-138390、昭57-198088。但他們制備固定化微生物細胞需在模具中成形，固定化后脫模，使用時要用機械方法破碎。因而使用起來很不方便，而且破碎后不均勻、不規則的形狀會影響使用效果，特別是當用于反應器中時。

本發明的目的就是為了解決上述方法存在的缺點。用新的方法制備出固定化微生物細胞，并使之具有酶活性高、機械強度好、外形為規則珠狀，適宜于在反應器中長期使用等優點。

本發明采用聚乙烯醇作為包埋微生物細胞的載體，用成形劑成形，低溫冷凍定形的方案。成形劑選用油脂類物質，以植物油或礦物油為佳。制備工藝是，首先把制備好的聚乙烯醇溶液與微生物細胞混合均勻，可用濃度在10%～20%之間的PVA溶液，微生物細胞與聚乙烯醇溶液的重量比選擇在1∶1至9范圍內。然后在細胞-聚乙烯醇混合物中加入成形劑，并充分攪拌，使之分散成珠狀，細胞-聚乙烯醇混合物與成形劑的重量比可以是1∶0.5至2。再將已成形的包埋微生物細胞在一定溫度下放置一段時間定形，一般需要在-10℃至-40℃溫度條件下保留8～20小時即可。待定形后即可除去成形劑，成形劑可回收以備重復使用，最后可經后處理，例如清潔處理等，則得到形狀規則的珠狀凝膠態成品固定化微生物細胞。

實施例

用本發明可制備工業上用于生產6-APA的固定化大腸桿菌細胞。

原料的配比：

濃度15%的PVA溶液????10克

大腸桿菌細胞????10克

菜籽油????20克

制備條件：

溫度????-20℃

時間????12小時

結果：

所得固定化細胞外形為規則珠狀凝膠態，酶活性為8u/克固胞，機械強度良好。

本發明可以應用于醫藥工業和食品飲料工業，改進傳統的發酵工藝。

本發明的特點是，用聚乙烯醇作載體價格便宜，成形劑可重復使用，因而成本低廉。制備工藝方法操作簡便，穩定性高。制備出的固定化大腸桿菌細胞酶活達到8u/克固胞，可以生產出濃度較高的6-APA轉化液，從而提高了生產效率。成品固定化微生物細胞外形為規則珠狀凝膠態，使用方便，機械強度優良，長期在較高溫度和壓力條件下使用無破裂。特別適于工業上在柱反應器中使用。