[其他]海產綠藻之培養方法

無效

• 申請號: 85103042
• 申請日: 1985-04-20
• 公開（公告）號: CN85103042B
• 公開（公告）日: 1987-01-14
• 發明（設計）人: 瀨戶明;藤田匡
• 申請（專利權）人: 日清制油株式會社
• 主分類號: A01G33/00
• 分類號: A01G33/00
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 巫肖南,李雒英

本發明系關于海產綠藻的培養方法，尤指可提高 廿碳五烯酸含量，以提高所培養的海產綠藻中總脂價 含量。且可加速生育速度的海產綠藻的培養方法。

廿碳五烯酸(Eicosapentanoic?acid以下簡稱 EPA)是生物體內各種前列腺素(Prostaglandin)關 聯物質的前驅體。近年來因發現具有抗血小板凝集 等生理活性，頗受矚目。以往EPA雖可由魚油分離 精制，但對魚油中的總脂質而言，EPA含量低至 10-15％左右，且在魚油中，EPA以外的高純度不 飽和脂肪酸中，含有較大量與EPA構造相似的脂肪 酸，不容易進一步加以濃縮。

另方面，海產綠藻在一定條件下培養時，其 EPA含量可達相當于總脂肪酸含量的30％左右或 以上，比魚油為高。然而，海產綠藻的生育速度慢，且 總脂肪酸含量低，故絕對量亦低，為其問題所在。

因此，本發明的目的，在于提供一種海產綠藻的 培養方法，可提高總脂質量(因而可提高EPA含量) 而且可提高生育速度。

依照本發明所提供的海產綠藻的培養方法，是利 用海水系培養基培養海產綠藻，其特征為在該培養基 中，添加選自碳酸氫鹽，乙酸和乙酸鹽中至少一種為 碳源，并加生物素加以培養。

本發明所述的海產綠藻應理解為本技術領域中 所定義的海產綠藻，包括Chlorella?Minutissima和 Chlorella?Bulgaris等。

如上所述，本發明的海產綠藻的培養方法，其特 征在于所采用的培養基是在海水系培養基中添加特 定碳源及生物素。

所用基本培養基，凡天然海水或人工海水(總稱 海水培養基)均可用。然而，在培養基中的氯化 鈉濃度按重量計以0.1-0.2％為佳(使用天然海 水時，可借加水等以調節其濃度)。氯化鈉含量超出 此范圍時，生育速度會顯著下降，附帶降低EPA含 量。

依照本發明，在上述海水系培養基中所添加的碳 源，有碳酸氫鹽，乙酸，乙酸鹽，或其中任意二種以上 的混合物。此碳源的添加量，通常為每公升培養基 約加30至1000毫克。如果添加量不到30毫 克/公升培養基，則結果無法提高所培養綠藻的總 脂質含量。另方面，添加量如超過1000毫克/公升 培養基，則顯示不出效果有何特殊提高。碳源較佳添 加量為100～600毫克/公升培養基。碳酸氫鹽的 例子有碳酸氫鈉，碳酸氫鉀等，乙酸鹽則有乙酸鈉，乙 酸鉀，乙酸銨等。

依照本發明，與上述碳源同時添加于海水系培養 基的生物素(biotin)，其量無特別規定，但在0.1微 克/公升培養基以下時，則幾乎沒有效果。生物素 較佳添加量為0.5-10微克。

除上述碳源和生物素外，海水系培養基尚可添加 硫酸銨等氮源，過磷酸鈣等磷源。氮源以約100毫 克/公升培養基的比率，而磷源以約10毫克/公 升培養基的比率添加為佳。

培養基的pH值會隨培養時間的增加而變化，但 至少在海產綠藻培養開始之前(即海產綠藻接種之 前)的培養基以設定于6至8的pH值為佳。

在本發明中，采用上述培養基時，海產綠藻(例 如chlorella?minutissima)最好在15℃至25℃溫度 培養。培養溫度超出此范圍時，生育速度下降，且綠 藻中EPA含量有下降的趨勢。培養時間通常為 3～20天。

依照本發明培養海產綠藻時，綠藻接種量無特別 限制，通常是以0-0.5克(濕菌體重量)/公升培 養基的比率接種。

依照本發明的海產綠藻培養方法，可加快生育速 度，保持總脂質中所占的EPA含量高，得以穩定生 產總脂質含量高的海產綠藻，這與選自碳酸氫鹽，乙 酸和乙酸鹽中至少一種碳源，以及生物素的相乘效 果，據推論系脂肪酸生成第一步驟中，促進丙二醯基 CoA生成的緣故。

此外，利用光合作用的碳源供給方法，已知有將 碳酸氣在暴氣中混入的方法，本發明與習知方法比 較，碳源的利用較佳，可降低生產成本。

依照本發明培養海綠藻后，將培養綠藻菌體以適 當溶劑，例如己烷和異丙醇之混合溶劑萃取，分離脂 質成分，利用常法鹵化分解。除去不鹵化成分后，收 集脂肪酸，以尿素附加物法飽和，并除去不飽和單脂 肪酸。如上所得脂肪酸，其EPA含量相當高，如欲 再提高純度則可利用硅膠柱色譜法。借此柱型色層 分析法分離，純度可達95％以上。

本發明實例如下：

實施例