[其他]酶法解離紫菜營養細胞育苗方法

無效

• 申請號: 85104059
• 申請日: 1985-05-26
• 公開（公告）號: CN85104059A
• 公開（公告）日: 1986-11-26
• 發明（設計）人: 方宗熙;戴繼勛;唐延林;劉萬順;包振民
• 申請（專利權）人: 山東海洋學院
• 主分類號: A01G33/02
• 分類號: A01G33/02;C12N9/00
• 代理公司: 山東海洋學院專利代理事務所
• 代理人: 王秋

內容：本發明屬于經濟海藻育苗技術。

在已有的技術中，公知的紫菜人工育苗方法是，果孢子采集、絲狀體培育和殼孢子采苗三個步驟^〔註1〕，這一采苗方法，僅絲狀體培育就需要5～6個月，需要專用的育苗室和培養設備，絲狀體培養中時有病害發生，殼孢子釋放易受環境條件的制約，育苗技術難度大，不易掌握，成本高。高產的壇紫菜在北方殼孢子采苗困難而不能推廣養殖。

為了克服已有的紫菜有性生殖育苗技術上的缺點，提高紫菜育苗技術和紫菜養殖的經濟效益，根據酶法可以解離紫菜葉狀體營養細胞再生植株的原理^〔註2〕，設計了紫菜無性繁殖的營養細胞育苗方法。

本發明的構思是，從食藻性海螺的軟體部分制備含有多種消化酶的復合酶，并加入葡萄糖或蔗糖配成營養細胞解離液，將冷藏保存在-20℃的紫菜葉狀體，剪碎放入解離液中，在25～30℃下使營養細胞解離。解離后，以清潔海水洗滌單細胞以清除多余的酶和糖，離心收集單細胞。將制備的營養細胞在育苗設備中加營養海水培養10～15天，然后置入采苗器具進行采苗1～2天，然后移至海上養殖。

本發明的最佳實施例是：

1、紫菜營養細胞解離液的制備：

采集新鮮的粒嶸螺在海水中饑餓囚養2～3天，洗滌后將海螺殼破碎，加海螺重量2倍的蒸餾水攪拌提取10分鐘，用紗布過濾除去渣滓，過濾液離心（10，000轉/分）30分鐘。上清液加入鹽酸調pH沉淀去雜蛋白，離心（10000轉/分）30分鐘。上清液加入1.8克分子的葡萄糖配成解離液。（為了長期保持酶的活性，可按文獻^〔註3〕中所提供的方法制成酶干粉保存。）

2、營養細胞的制備：

置于-20℃的冷冰設備中保存的條斑紫菜葉狀體在常溫海水中培養2天，切成小塊，放置于細胞解離液中25℃保溫3小時，然后用300目篩絹過濾，濾液在10000轉/分下離心3分鐘。沉淀下來的細胞用海水洗滌三次，每次洗滌后，用同樣離心方法去除洗滌液，收集單細胞。

3、單細胞培養及采苗：

將解離制備的單細胞置入育苗設備中，加入加營養鹽海水含氮8ppm，磷1ppm，以及二價鐵離子1ppm，光照培養（光強2000Lux左右）。溫度16～22℃，培養14天后，便有大量可供采苗的孢子放散，放入采苗器具，充氣采苗36小時后，移至海上養殖。

〔註1〕：中國科學院海洋研究所藻類實驗生態組、藻類分類組，1978，條斑紫菜的人工養殖，科學出版社。

〔註2〕：唐延林，1982，紫菜營養細胞和原生質體的分離和培養，山東海洋學院學報，第12卷第4期，37～50。

〔註3〕：劉萬順，唐延林，劉學武，方宗熙，1983，海螺酶制備和性質的研究，第11屆國際海藻學術討論會論文集，319～320。