[其他]生產(chǎn)有用物質(zhì)的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 85104701
• 申請(qǐng)日: 1985-06-19
• 公開（公告）號(hào): CN85104701A
• 公開（公告）日: 1986-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 前田進(jìn);古澤滿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 第一制藥株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C12N15/00
• 分類號(hào): C12N15/00;//
• 代理公司: 中國(guó)專利代理有限公司
• 代理人: 羅宏,劉元金

本發(fā)明是關(guān)于利用遺傳工程技術(shù)生產(chǎn)可用作藥物的物質(zhì)的方法，特別是關(guān)于較之常規(guī)方法更為有效地生產(chǎn)這些物質(zhì)的方法，尤其是涉及利用病毒DNA于體外和體內(nèi)生產(chǎn)這類物質(zhì)的方法。另一方面，本發(fā)明涉及利用核多角體病毒，于家蠶〔中國(guó)桑蠶（Bombyx????mori）〕體內(nèi)有效地生產(chǎn)各種有用物質(zhì)的方法。本發(fā)明也涉及到用于實(shí)施上述方法的載體和重組體病毒DNA，以及以其生產(chǎn)同樣物質(zhì)的方法。

以前曾報(bào)導(dǎo)過許多借助重組DNA技術(shù)的優(yōu)越性，使用載體等在大腸桿菌、枯草桿菌、啤酒酵母等微生物體內(nèi)生產(chǎn)有用物質(zhì)的方法。

有一篇報(bào)導(dǎo)述及試圖利用一種其結(jié)構(gòu)基因被替換后的病毒DNA（Autographa????californica核多角體病毒DNA），在培養(yǎng)的細(xì)胞（一種建立的Spodoptera????frugiperda細(xì)胞系）內(nèi)生產(chǎn)β-干擾素和β-半乳糖苷酶〔Molecular????and????Cellular????Biology，3（12），2156-2165（1983）;ibid.，4（3），399-406（1984）〕。但問題在于用來完成該方法的A.Californica病毒是可在外界生存的有害毒株。因此以所說的方法來生產(chǎn)有用物質(zhì)是不能令人滿足的。本發(fā)明人進(jìn)行了一些試圖提供一種更好方法的研究，以生產(chǎn)有用物質(zhì)現(xiàn)已完成了本發(fā)明。

本發(fā)明提供一種利用中國(guó)家蠶核多角體病毒（以下縮寫為BmNPV）的DNA，以遺傳工程技術(shù)生產(chǎn)如蛋白質(zhì)或糖蛋白等有用物質(zhì)的方法，特別是提供一種利用所說的BmNPV????DNA中啟動(dòng)子區(qū)域的功能優(yōu)點(diǎn)與有用物質(zhì)之基因重組而得到的重組體DNA、以及用于這種重組的重組載體，以有效地生產(chǎn)有用物質(zhì)的方法。本發(fā)明還提供一種利用與BmNPV重組轉(zhuǎn)移載體結(jié)合方式影響轉(zhuǎn)染的方法，該重組的轉(zhuǎn)移載體含有一個(gè)原來存在于多面體蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)基因之上游，且仍包括所說結(jié)構(gòu)基因之啟動(dòng)子區(qū)域的5′上游BmNPV????DNA片段、一個(gè)翻譯起始密碼子以及一個(gè)產(chǎn)生有用物的基因，帶有或不帶有原先存在于所說的多角體蛋白結(jié)構(gòu)基因下游的3′下游BmNPV????DNA片段。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種生產(chǎn)有用物質(zhì)的方法，其包括用重組轉(zhuǎn)移載體和BmNPV????DNA的混合物接種培養(yǎng)的細(xì)胞或活的家蠶體以便形成重組體BmNPV，從而在所說的細(xì)胞或活體內(nèi)產(chǎn)生所說的重組BmNPV，或者以同樣方法用重組BmNPV接種培養(yǎng)的細(xì)胞或活的家蠶-該重組BmNPV是通過由BmNPV????DNA和大腸桿菌質(zhì)粒如PBR322制備一個(gè)連接的DNA，再用其它的適當(dāng)方法進(jìn)一步用生產(chǎn)有用物質(zhì)的基因取代多面體蛋白結(jié)構(gòu)基因而構(gòu)建的，并在所說的細(xì)胞或活體內(nèi)增殖所說的重組體BmNPV。本發(fā)明的一個(gè)特殊方面是，其所提供的制造有用物質(zhì)的方法包括在培養(yǎng)的細(xì)胞或宿主（特別是由中國(guó)家蠶得到的細(xì)胞系或恬的家蠶體）內(nèi)增殖重組的中國(guó)家蠶核多角體病毒（BmNPV），該重組體是通過重組含有原先存在于多角體蛋白結(jié)構(gòu)基因上游且仍包括所說的結(jié)構(gòu)基因啟動(dòng)子區(qū)域、一個(gè)翻譯起始密碼子和產(chǎn)生有用物質(zhì)的基因的5′上游BmNPV????DNA片段而產(chǎn)生的，其帶有或沒有原先存在于所說的多角體蛋白結(jié)構(gòu)基因下游的3′下游BmNPV????DNA片段。另一方面，本發(fā)明提供了一種載體，其含有最初存在于所說的多角體蛋白結(jié)構(gòu)基因上游且仍包括所說的結(jié)構(gòu)基因之啟動(dòng)子的5′上游BmNPV????DNA片段，以及一個(gè)最初存在于所說之結(jié)構(gòu)基因下游的3′下游BmNPV????DNA片段，另外，剛剛提到的這種載體中的5′上游DNA片段是跟在翻譯起始密碼子和產(chǎn)生有用物質(zhì)的基因之后的。再一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種生產(chǎn)有用物質(zhì)的方法，其包括由BmNPV????DNA上切去多角體蛋白結(jié)構(gòu)基因，連同有自所說的結(jié)構(gòu)基因的且包括所說的結(jié)構(gòu)基因的啟動(dòng)子區(qū)域的5′上游部分，以及自所說的結(jié)構(gòu)基因下游的3′下游部分，用產(chǎn)生有用物質(zhì)的基因去置換所得到的DNA片段的結(jié)構(gòu)基因部分，將置換產(chǎn)物插入載體中，將如此產(chǎn)生的與BmNPV????DNA與BmNPV????DNA聯(lián)合轉(zhuǎn)移到細(xì)胞或宿主中，以便轉(zhuǎn)染并增殖所得到的重組BmNPV????DNA;經(jīng)與產(chǎn)生有用物質(zhì)的基因重組而產(chǎn)生的重組BmNPV????DNA為異源基因;剛剛提到的這種重組BmNPV????DNA，其重組是通過在多角體蛋白基因區(qū)域置換，或在某些其它區(qū)域插入而實(shí)現(xiàn)的;一種以遺傳工程技術(shù)生產(chǎn)有用物質(zhì)的方法包括利用BmNPV????DNA作載體;而且以遺傳工程技術(shù)生產(chǎn)有用物質(zhì)的一種方法包括利用原來存在于多角體蛋白結(jié)構(gòu)基因之上游并仍包括所說的結(jié)構(gòu)基因之啟動(dòng)子區(qū)域的5′上游BmNPV????DNA部分、以及原來存在于所說的結(jié)構(gòu)基因之下游的3′下游BmNPV????DNA部分。