[其他]骨髓素的制備方法

無效

• 申請號: 85106322
• 申請日: 1985-08-23
• 公開（公告）號: CN85106322B
• 公開（公告）日: 1987-03-18
• 發明（設計）人: 陳濂生;肖斐亞;張洪碧;劉漢民;陳德明;李芳芳;曹照根;任時仁;劉孝峰;王孟淑
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍309醫院;北京大學北京市第一生物化學制藥廠
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28
• 代理公司: 核工業部專利法律事務所
• 代理人: 孟慶銓,張水俤

本發明屬于藥品制備方法，涉及一種可用作腫瘤、白血病放射治療和化學藥物治療輔助藥物，再生障礙性貧血和免疫缺陷癥，特別是B細胞免疫缺陷癥的治療藥物-骨髓素的制備方法及臨床應用。

骨髓素存在于脊椎動物紅骨髓中，在七十年代初就有關于骨髓中存在一類生物活性物質，這種生物活性物質可以抑制多能干細胞進入分裂周期，從而保護了多能干細胞免受藥物殺傷的報道，但是沒有關于這類生物活性物質提取和制備方法的報道。1982年法國Frinde]及Guigon等人發表了一種提取制備方法。（見CancerResearchVol.42，638，1982）他們從胎牛骨髓中分離到幾種組分，其中分子量在3500以下的組分對致死量阿糖胞苷引起的小鼠毒害有保護作用。該篇文章提到的制備方法是將胎牛骨髓在pH＝7.2的磷酸鹽緩沖液中攪拌均勻，在50000×g/小時下離心，取其上清液在軟化水中透析一夜，將透析外液冷凍干燥，再在pH＝7.8，濃度為50mM的碳酸氫銨緩沖溶液中溶解，裝柱，在SephadexG-10柱上用相同的緩沖溶液以10毫升/小時的流速淋洗，進行柱層析分離，將洗脫液冷凍干燥，放在-20℃下保存。這種制備方法存在如下缺點：1.原料來源不易，成本昂貴;2.沒有找到含紅骨髓最多的骨髓;3.僅靠透析分析分子量較小的成分，沒有破碎細胞的程序，質量不穩定，產率也低;4.引入一些無機鹽成分。該文中未涉及這種生物活性物質的臨床應用。

本發明的任務是尋求一種來源豐富、價格低廉的原料，提供一種簡單、可靠、高產的制備方法，同時用于臨床。

成品為類白色或微黃色凍干塊狀物，含蛋白質的量應為標示量的90.0～115%;

酸堿度：取本品1支加注射用水1毫升，溶解后依中國藥典二部附錄檢查方法測pH值，應為6.0～7.5;

澄明度：取本品1支加注射用水1毫升，溶解后依中國藥典二部附錄檢查，應符合規定;

干燥失重：取本品，以五氧化二磷為干燥劑，減壓干燥至恒重，依中國藥典二部附錄檢查，減失重量不超過5.0%;

熱原：取本品2支加注射用水2毫升，依中國藥典二部規定檢查，劑量按家兔體重每公斤注射1毫克，結果符合規定;

安全試驗：取本品1支加注射用水0.25毫升，依中國藥典二部規定檢查，劑量為每只小白鼠尾靜脈注射0.25毫升，結果應符合規定。

本發明所得產品毒理試驗如下：

慢性毒理試驗：取本品1支加注射用水0.5毫升，取體重為250～350克的健康豚鼠5只，連續3日隔日腹腔注射致敏液0.5毫升。2周后，再自股靜脈注射1毫升，注射后15分鐘內，觀察動物沒有連續干咳、連續前爪抓鼻、明顯豎毛、四肢發軟躺臥、呼吸困難、痙攣、虛脫及死亡等現象。

急性毒理試驗：取小鼠5只，自尾靜脈注射本品1支于每只小鼠，相當于人體用量500～1000倍（人體正常用量為2～4毫克/50公斤次），48小時后觀察小鼠沒有上述不正?，F象。

無菌試驗：取本品1支加培養液（厭氧、需氧、霉菌）至1毫升，依中國藥典二部附錄檢查，符合規定。

活力測定：經實驗，骨髓素對多能干細胞有非常顯著的抑制作用。

含量測定：取本品1支加注射用水1毫升，按Folin酚試劑法測定其蛋白含量。

本發明所得骨髓素用于臨床試驗結果如下：

1.骨髓素支持肺癌患者放射治療和化學藥物治療的效果。

在放射治療和化學藥物治療開始前一周起用骨髓素，每日肌肉注射1針，每針含2毫克蛋白，除加適量維生素外，不用任何升血藥和影響免疫機制的藥，直到治療結束。在放射治療和化學藥物治療的前期、中期和后期觀察白細胞等有關化驗指標和脫發、食欲、體重等臨床指標，以此作為實驗組。

以升血藥利血升，鯊肝醇支持肺癌患者放射治療和化學藥物治療作為對照組。觀察指標與實驗組同。

實驗組觀察了10例肺癌患者，除1例在用藥第七周出現過敏反應（原因待查）外，其他無不適反應?；颊呤秤⒕褫^好，無脫發，無明顯的放射治療和化學藥物治療的副作用，肝、腎功能未見異常。治療前期白細胞數平均為6400/mm³，治療中期平均為5850/mm³，治療后期平均為6100/mm³，其下降程度為8.6～4.7%。