[其他]線蟲的液體培養

無效

• 申請號: 85107423
• 申請日: 1985-09-29
• 公開（公告）號: CN85107423A
• 公開（公告）日: 1987-04-08
• 發明（設計）人: 加里·愛德華·佩斯;威爾弗雷德·格羅特;戴維·愛德華·皮特;賈尼斯·瑪格麗特·皮特
• 申請（專利權）人: 澳洲生物科技公司
• 主分類號: A01K67/00
• 分類號: A01K67/00
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 巫肖南,李雒英

本發明是關于用液體培養法大規模地生產致昆蟲病的線蟲。

致昆蟲病的線蟲對于生物學上控制很多不同種類的昆蟲是很有效的。不過，要在工業上采用線蟲為生物殺蟲劑則受到很多限制，包括不能大批地生產線蟲，和不能以化學殺蟲劑的值格來生產線蟲，因此能夠大范模地生產線蟲是有很大的工業價值。

致昆蟲病的線蟲須于它們的生活史中經過不同的發育期。在宿主昆蟲血腔中的天然環境下，傳染期（J3）的線蟲出鞘、驅逐它們的細菌、增加代謝活動和開始攝食。專性于線蟲的菌株Xenorhabdus????nematophilus或X.luminescens由線蟲分泌出來，并于血腔內繁殖。該線蟲生長至成蟲的大小，并繁殖和產卵，這些卵的生長經過J1和J2期，并在1至3星期后生產出下一代傳染期（J3）的線蟲，這是傳染性的線蟲離開傳昆蟲尸體，并尋找另一個新的宿主。細菌性敗血病是引致幼蟲死亡的主要原因，不過，線蟲的生長和繁殖或線蟲所產生的殺蟲物質，在沒有共生細菌時，亦會引致幼蟲死亡。

在工業上使用致昆蟲病的線蟲，以控制對經濟有重大影響的害蟲的主要限制是不能在離體的培養中生產大量的傳染性（持久期）線蟲在活體培養中，特別是用大臘螟幼蟲，只為研究者提供了足夠的材料作為實驗室和有限范圍內試驗之用。

美國專利第4，334，493號透露了一種在體外大量養殖的方法，采用了均化的廢料于海綿基質上。這方法及其整個途徑顯示了目前培養線蟲的最新方法，并在其他方法中，這是最適合于大模范生產的。線蟲學家都贊成于生長培養基內采用固態的支承，貝丁（Bedding）在Ann????appl·Biol·（1984），104，117-120中說明須要采用固體基質以促進線蟲培養內空氣的流通，貝丁亦指出就算是輕微的搖動亦差不多完全抑制線蟲的成長，這更支持了在本技術中眾所相信的說話，即是大規模的液體培養法是不可能的。不過，如果能用液體培養法大規模地培養線蟲是最好的，因為液體培養法是更容易擴大以便生產更多的線蟲，液體培養法亦方便維持無菌的環境，控制及收獲線蟲。

雖然致昆蟲病的線蟲可在液體培養中成長，但只能達到約少于1公升的容積。舉例在營養學的研究中，斯托爾（Stoll，1953和1961）、杰克遜（Jackson????1962，1965a-1956b和1973）、漢森等人（Hansen????et????al，1967）洛厄和比克（Lower????and????Buec????cher????1970）和比克等人（Buecher????et????al，1970）都采用了體積少于100ml的液體培養。漢森等人（Hansen????et????al????1967）和塔雷卡盧（Tara????Kanow????1983）則采用薄的液體層來培養線蟲。

時至今日仍沒有刊登出任何采用傳統發酵系統來大規模（多于1公升）于液體中培養致昆蟲病的線蟲。

上述的液體培養生產出低濃度的幼態傳染性線蟲（每ml液體有數千條線蟲），并包括有傳染性和非傳染性的幼態及成長的能致昆蟲病的線蟲。只有傳染期的線蟲能有效地控制昆蟲的數目，并于儲藏和應用期間繼續生存。混合生長期亦會減低傳染期的線蟲的壽命，因此生產出混合生長期的方法在經濟角度上來說是不理想的。

在文獻中所述的小規模的液體培養線蟲法不會遇到大規模培養的困難，例如為線蟲和細菌的混合培養提供足夠的氧氣，及移走CO₂和代謝作用的其他揮發性產物。

我們的研究顯示出用傳統的裝置了葉輪（平直葉片）的發酵罐來培養線蟲，比較瓶的震蕩培養有更高的產量，但由于這傳統的發酵罐所遇到的高剪力和應力，所以這方法亦是很不經濟。

發明者用低剪力（內導水管）的氣升發酵罐進一步研究，顯示出在導水管底部由整體流動速度所產生的氣升是從懸浮重的雌性線蟲。

目前的發明者發現只要在制備培養介質時和在培養過程的本身遵循某些臨界參數，要大規模地用液體培養致昆蟲病的線蟲，特別是生產高濃度和較凈正的傳染期線蟲是可行的。

本發明包括了大規模地用液體培養致昆蟲病的線蟲的方法，特別是生產高濃度和較凈正的傳染期線蟲，其中要把培養的環境維持于盡量減低剪力，但仍能容許適量的搖動，氣體交換和懸浮線蟲。

本發明的其中一個形式包括了大規模地用液體培養致蟲病的線蟲的方法，特別是生產高濃度和較凈正的傳染期線蟲，其中上述線蟲的培養介質是預先線蟲的共生細菌接種，該些細菌是如此生長或處理過，可減低對上述線蟲有毒或有抑制作用的化合物。