[其他]金屬螯合物的單克隆抗體

無效

• 申請號: 85107873
• 申請日: 1985-10-26
• 公開（公告）號: CN85107873A
• 公開（公告）日: 1987-05-06
• 發明（設計）人: 克勞德·F·馬里斯;加里·S·戴維德
• 申請（專利權）人: 海布里蒂克公司
• 主分類號: C12P1/00
• 分類號: C12P1/00;C12N15/00;A61K39/395;G01N33/20
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 辛敏忠,顧柏棣

本發明涉及一些單克隆抗體、涉及具有螯合劑的金屬離子螯合物，以及把這些單克隆抗體應用于診斷和治療。

單克隆抗體已越來越廣泛地成為診斷治療疾病和了解生理狀況的重要工具。它們也有希望應用于工業，例如：從非親合純化法難以提純的混合物中，提純商業上有價值的材料。

上述各種應用中，選擇抗體是基于其與抗原結合的能力。某些應用過程，抗體可不用修正地加以使用。例如：用未加修正的抗體進行被動治療。然而，大部分應用過程，包括最通行的商業上的應用，常是用一種以某種方式修正了的抗體。該抗體可能是結合到一種固態物上，并在親合純化或免疫測試中，作為一種免疫吸附劑使用。

在另一些應用中，抗體可用放射性核素標記，這種放射性核素標記的抗體診斷時，用于鑒定抗原，或用于活體內的示蹤。經用放射性核素，藥品或毒物標記的抗體也可用于治療。

標記單克隆抗體的復雜性在于，每一抗體為一獨立的化合物，具有其自身的特異性標記。所以，簡單、有效標記方法是非常重要的。

在這一方面，我們建議：通過一種金屬螯合劑螯合金屬，用金屬的放射性核素標記單克隆抗體。螯合劑首先與選擇的單克隆抗體結合。由于相同的螯合劑可以結合一系列不同的金屬，因而需要制定該螯合劑結合抗體最優的化學程序，以使該螯合劑將要結合的某種放射性核素能標記抗體。當這個程序大大地簡化用放射性核素標記單克隆抗體時，仍需要測定抗體與螯合劑各種結合的最優條件。

我們驚奇地發現，可得到的單克隆抗體，可同某種螯合劑與特定金屬組成的螯合物相結合。此結合優于該單克隆抗體同螯合劑本身的結合，或同螯合劑與其它金屬組成的螯合物的結合。例如：我們用銦（Ⅲ）金屬與L-氨基芐乙二胺四乙酸的螯合物結合到作為免疫原的鎖眼血蘭蛋白上，而得到一種單克隆抗體。免疫原與銦（Ⅲ）螯合物的親合常數大于10⁹M^-1。與其相比，該抗體同L-氨基芐乙二胺四乙酸與其它金屬離子的螯合物的親合力低得多（結合常數＝10⁸M^-1，或更低）。

抗體對螯合物顯示的特異性可用于把放射性核素結合到抗體上，也用于純化微量金屬和下述的其它用途。

如上所述，本發明提供了對某種螯合劑與特定金屬組成的螯合物有特異性結合的單克隆抗體。此種特異性結合的親合力強于該單克隆抗體與螯合劑本身的結合，或該螯合劑與其它金屬組成的螯合物的結合。這里用的單克隆抗體被認為對一種特定金屬和螯合劑形成的螯合物顯示特異性，因為，該抗體與螯合物的結合常數大大地高于（10倍于）該抗體與螯合劑本身或螯合劑與其它金屬組成的螯合物的結合常數。用于本發明的螯合劑是由Adams等人發現的，已于1981年10月27日申請專利，專利號為：315，206，已在參考文獻中披露，下面的試驗表明：本發明是用L-氨基芐乙二胺四乙酸的銦（Ⅲ）金屬螯合物作為半抗原。

例Ⅰ：制備L-氨基芐乙二胺四乙酸與銦（Ⅲ）金屬螯合物。

鎖眼血蘭蛋白9.3毫克在265微升pH9的水溶液中與L-SCN-CH-CHEDTA在36℃下反應8小時。然后與90微升0.1摩爾檸檬酸銦混合，在1毫摩爾EDTA，0.15摩爾的氯化鈉溶液中透析，測定在310毫微米處，硫脲基團的吸收光譜，結果測出每毫克蛋白中含螯合物0.1毫克。

例Ⅱ：制備單克隆抗體

產生抗體的雜交細胞系制備如下：用上述抗原重復免疫BALB/C小鼠，取其脾細胞，把它們與P3.653骨髓瘤細胞系的變種融合，（見“單克隆抗體”一書，Gerhard著，Kennett等人編輯，Plenum出版，紐約，1980年），所得雜交細胞用固態第二抗體放射免疫測試篩選之，使其能與銦-氨基芐-EDTA相結合（Wang等人，“免疫方法雜志”，18卷，157頁，1977）。根據未標記抗原結合抑制所示的測定的高滴度和相應地高親合力，我們選出、命名兩種抗體：CHA255和CHB235，并對它們進一步研究，將其注射到BALB/C小鼠腹膜腔內，形成腹水。從這些鼠的腹水中通過DEAE纖維柱離子交換層析，來純化單克隆抗體。（Parham等人，在免疫方法雜志，53卷，133頁，1982年）。

例Ⅲ：測定結合常數