[其他]在防治鱗翅目蟲害方面具有改進活性的蘇云金芽孢桿菌制備方法及生成的新菌種

無效

• 申請號: 85108207
• 申請日: 1985-10-09
• 公開（公告）號: CN85108207A
• 公開（公告）日: 1986-09-17
• 發明（設計）人: 丹尼斯·霍勒斯·伯吉斯;保羅·賈勒特
• 申請（專利權）人: 農業遺傳工程公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;A01N61/04;//
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 劉元金,羅宏

本發明是關于具有昆蟲致死活性的產毒桿菌新菌種的制備方法及生成的新菌種和使用這種桿菌以防止植物受某些害蟲的影響。

更確切地說，本發明是關于在防治鱗翅目蟲害方面具有改進殺蟲活性的蘇云金芽孢桿菌的新菌種。

許多重要的本國的或/和商售的植物易受到鱗翅目蟲的侵襲和損害，世界各地普遍地發現了這些蟲害，當前，控制它們需要重復使用現有的昂貴殺蟲劑。

許多農作物對大量的鱗翅目害蟲敏感，其中，最值得注意的害蟲為棉花葉蟲（Spodoptera????littoralis），棉蒴蟲（Heliathis????armigera），煙草芽蟲（Uteliothis????Uirescens），菜蛾屬（Plutella????Waculipem-is），甘藍夜蛾（Mamestra????spp）和粉蝶屬（Pieris????brassicae）。

廣譜殺蟲劑是保護農作物有用和重要的工具，但是，廣譜化學殺蟲劑的亂用會破壞許多天然調節劑，因為大多數化學殺蟲劑相對來說是無選擇性的，從而破壞非目標生物體，包括有益的消滅蟲害的其它動物和寄生物，同時也使某些昆蟲出現對化學殺蟲劑的耐受力，常常使次要的蟲害變成主要的蟲害。

采用有選擇性的細菌殺蟲劑，這種細菌殺蟲是利用天然產生的細菌作為活性和宿主的特定組分，有助于克服許多這些問題。

細菌殺蟲劑的一個例子是蘇云金芽孢桿菌，其中，它的大量菌種是市場上可得到的，目前利用它的敏感幼蟲，特別是鱗翅目族昆蟲的幼蟲吞食后所具有的特殊殺蟲活性。

使用這些菌種益蟲無副作用，蘇云金芽孢桿菌恰好符合現行的農業理論，這種理論支持使用天然產生的生物體來抑制有害的昆蟲。蘇云金芽孢桿菌是一個廣泛分布的桿狀的，孢子形的，需氧的，革蘭氏陽性微生物，其特征在于，在孢子形成周期中，產生一種或多種蛋白質多分孢子晶體，它對鱗翅目幼蟲的致病性可以用檸檬酸作為它唯一的碳源;以及它的孢子具有特別高的磷酸含量。

蘇云金芽孢桿菌是一個周圍環境中的普通的棲居物，并且能夠在一定類型的土壤中生長。目前，尚未了解蘇云金芽孢桿菌對人，動物（pets）烏類、魚類、蚯蚓、大多數益蟲或植物這樣一些生命形式的不利影響。它對敏感昆蟲的致病性主要是由于多分孢子的晶體存在。在孢子形成時間內，這種多分孢子晶體占細胞干基重量的30-40%。

蘇云金芽孢桿菌僅僅當被吞食時才具有活性，發現鱗翅目蟲在吞食若干小時后停止進食，并停止了對植物的損害。由于這種晶體的毒素，大多數種類的害蟲約24到72小時后死于毒血癥，有時，還伴隨有由于芽孢桿菌存在而帶來的敗血病。

因此，它的基本作用是由于只有在幼蟲的腸中溶解后才起作用的晶體。

晶體的活性是由于堿性的pH值和腸內物中蛋白水解酶的組合產生的，反應取決于鱗翅目幼蟲腸子的高pH值（pH＞7），這種高pH值會使晶體的毒素組分釋放出來，這些毒素使腸中壁發生故障，引起停止進食。

這樣釋放到腹腔的細菌的成長也造成了使部分昆蟲死亡的敗血病。

很清楚，使用蘇云金芽孢桿菌作為殺蟲劑，提供了有效的和環境上能許可的防治鱗翅目蟲害的方法。

由于這一原因，當前正致力尋找具有改進殺蟲劑活性的新菌種。它們對給定種類的害蟲有巨大的毒性或是具有更廣譜的殺蟲活性。然而，在實踐中，要獲得高毒性和廣譜活性的結合是很困難的。

目前已經發現，蘇云金芽孢桿菌的一個新菌種GC-91，在防治鱗翅目蟲害的某些種類方面具有改進的殺蟲劑活性。

于是，本發明提供了蘇云金芽孢桿菌的一種新菌種GC-91或在防治鱗翅目蟲方面具有殺蟲活性的衍生物或其突變體。該菌種的樣品已經寄存在倫敦Nw9.5HT????Colindae大街。國家收集培養處（NCTC）中央公共健康實驗室，登記號：NCTC11821，于1984年9月7日儲存。

新菌種有效結合了蘇云金芽孢桿菌兩個菌種的強烈的殺蟲活性，其中之一是不產生孢子的突變株，可以不呈現殺蟲活性，盡管它含有如果產生孢子或晶體就能使它具有殺蟲活性的遺傳物體。因此，由使用兩種突變株混合物得不到該新菌種GC-91的奇特效果。

新菌種在防治galleria、甘藍夜蛾（Mamestra）棉蒴蟲（Helioth-is）、葉蟲（Spodoptera）和Pieris屬鱗翅目蟲害方面具有改進殺蟲活性。

本發明也提供了一個生產蘇云金芽孢桿菌的方法，通過將兩個有關原始菌種不同的殺蟲特性給合到單獨一個菌種里，從而具有改進的殺蟲劑活性，該方法包括：