[其他]克拉瓦雷酸及其鹽和酯的制備方法

無效

• 申請號: 85108444
• 申請日: 1985-10-26
• 公開（公告）號: CN85108444A
• 公開（公告）日: 1986-08-06
• 發明（設計）人: 何塞·路易斯·費爾南德斯·普恩特斯;米格爾·安赫爾·莫雷諾·巴列;弗朗西斯科·薩爾托·馬爾多納多;托馬斯·奧萊羅斯·伊薩德;路易斯·科斯塔·普拉;何塞·馬麗亞·費爾南德斯·索薩-法羅
• 申請（專利權）人: 抗菌素公司
• 主分類號: C12P17/10
• 分類號: C12P17/10;//;1465)
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 劉元金

本發明涉及克拉瓦雷酸（暫譯此名，原文為Clavulanic????Acid）及其可供藥用的鹽和酯的制備方法。

克拉瓦雷酸即（2R，5R，Z）-3-（2-羥亞乙基）-7-氧代-4-氧雜-1-氮雜雙環〔3，2，0〕-庚烷-2-羧酸是一種已知的化合物，其結構如下：

該化合物及其鹽和酯，可作為β-內酰胺酶抑制劑，能抑制由革蘭氏陽性和革蘭氏陰性有機體所產生的β-內酰胺酶的活動。因此這些化合物可用在藥物成份里，以防止β-內酰胺抗生素的失活。此外，克拉瓦雷酸本身也具有抗菌活性。

克拉瓦雷酸是由各種不同菌株的微生物產生的，例如，這些菌珠屬于鏈霉菌屬的有：S.Clavuligerus????NRRL3585（美國專利4110165），S.jumonjinensis????NRRL5741（英國專利1，563，103），S.Katsurahamanus????IFO13716（日本專利83，009，579）和鏈霉菌屬球菌（SP.）P6621FERM2804（日本專利55，162，993）。

人們一直通過改進發酵過程來提高克拉瓦雷酸的產量。例如英國專利1，571，888透露，嚴格地將pH控制在6.3至6.7范圍內可以顯著地增加產量。

增加產量的辦法，更常用的是改進純化過程。例如，由于克拉瓦雷酸的鹽通常比游離酸更穩定，因此，可采用其鹽，例如堿金屬和堿土金屬的鹽來增加萃提產量。

美國專利4，110，165敘述了一種基于克拉瓦雷酸及其鹽在水相和有機相之間溶解度不同的萃取過程。在萃取之后還要用吸附劑提純幾次。因此，這種萃取方法過于沉長又不經濟。

所以，直接從有機相將克拉瓦雷酸結晶出來更為理想。按西班牙專利494，431的辦法，是在有機相中加入胺，如叔丁胺，可以使克拉瓦雷酸直接從有機相中結晶出來，然后與一個堿交換，就可轉化成鉀鹽。

鋰鹽也被認為是一種制備克拉瓦雷酸的有用的中間體，因為它溶解度低而且很容易轉化成可供藥物制劑采用的鹽和酯。例如，美國專利4，490，294透露，克拉瓦雷酸溶液與離子型的鋰化合物的水溶液反應可生成克拉瓦雷酸鋰。英國專利1，543，563透露了另一種制備克拉瓦雷酸鋰的路線，該路線是采用經粒狀炭過濾后的肉湯進行吸附，再用離子交換樹脂處理，然后將克拉瓦雷酸鋰進行結晶。

也有人提出，發酵的肉湯直接吸附在樹脂上之后，用異丙醇作溶劑將克拉瓦雷酸鋰結晶出來。這個過程很難實現而且產量極低。

由此看來，采用現有技術的發酵和純化方法，只能制得不純的克拉瓦雷酸，而且產量相當低。

根據本發明的第一個方面，本發明提供一種利用繁殖的微生物在培養基中發酵的方法制備克拉瓦雷酸的方法，按照這種方法，在發酵過程中至少要加入部分的可同化碳源。可以相鄰，不受理論所限制，若有控制地加入碳源就不會出現降解代謝調節。不管理論是怎么說的，現已觀察到，在發酵過程的任何一個時間，小心地避免碳含量變得太高，就可以使發酵獲得顯著的改進。下面列舉一些比較理想的實施例子：

將可同化碳源的含量保持在低于2%較為理想，低于1%則更好（對于固體碳源，百分率是以重量/體積作根據，對于液體碳源，則以體積/體積作根據）。同樣道理，將碳源加入到有效培養基中時，應以少量加入為宜，可采用分批加入，也可采用連續加入。但無論采用哪種加入方式，碳源的加入量，相對于培養基來說，以不超過1%為好，不超過0.5%更好。實際上，培養基中碳含量維持在低于0.25%，例如低于0.15%比較好。任何可同化碳源都可使用，包括多羥基化合物或碳水化合物，但最好是采用一種化學結構明確的碳源（亦即是一種化學結構已知的含碳化合物）。確定的碳源的分子量一般低于500。分子中所含碳原子數目最多為12個比較合適，例如單糖或雙糖，或線型多羥基化合物。這類化合物的例子包括麥芽糖和甘油。本發明另一較佳的選擇，可同化碳源是糊精，淀粉或糊化淀粉，更廣泛地說，碳源通常是可溶于水或可溶混于水的。

S.clavuligerus的應用，特別是S.clavligerus????NRRL????3585，現在較為普及。對于這些微生物，較適合的碳源包括麥芽糖，甘油，糊精和糊化或未糊化的淀粉。葡萄糖、果糖、蔗糖和乳糖不太容易被S.clavuligerus同化，所以對于這類微生物不太適用。