[其他]哺乳動物細(xì)胞內(nèi)因子Ⅶ和Ⅸ的活性表達(dá)

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 86102644
• 申請日: 1986-04-16
• 公開（公告）號: CN86102644A
• 公開（公告）日: 1987-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 弗里德里克·S·哈根;馬克·J·馬雷;沙羅恩·J·布斯比;卡思利恩·L·伯克納;馬加里特·Y·英斯利;里查德·G·伍德·布里;查利斯·L·格雷
• 申請（專利權(quán)）人: 津莫吉尼蒂克斯公司
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;A61K35/12
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利代理部
• 代理人: 顧柏棣,辛敏忠

1、一種DNA的建造，包括一個給蛋白編碼的核苷酸順序，該蛋白質(zhì)經(jīng)活化，在血凝方面，與因子Ⅶa有相同的或本質(zhì)上相同的生物活性。

2、權(quán)利要求1的DNA建造，其中所說的核苷酸順序至少為部分的因子Ⅶ編碼，該核苷酸順序包括第一條核苷酸順序，第一核苷酸順序編碼鈣束縛區(qū)，鈣束縛區(qū)又連到第一核苷酸順序下游位置的第二核苷酸順序上，第二核苷酸順序編碼因子Ⅶa絲氨酸蛋白酶活性的催化區(qū)，聯(lián)合順序編碼蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)經(jīng)活化，在血凝方面，與因子Ⅶa有相同的或本質(zhì)上相同的生物活性。

3、權(quán)利要求2的DNA建造，其中所說的第一核苷酸順序基本上是基因順序，該基因是從為因子Ⅶ，因子Ⅸ，因子Ⅹ，蛋白質(zhì)C，凝血酶元，和蛋白質(zhì)S編碼的一組基因中挑選來的。

4、權(quán)利要求2的DNA建造，其中所說的第一條核苷酸順序也為前導(dǎo)肽編碼。

5、權(quán)利要求2的DNA建造，其中所說的第一核苷酸順序包括被合成的雙線寡核苷酸。

6、權(quán)利要求5的DNA建造，其中所說的合成的雙線寡核苷酸編碼基本為因子Ⅶ的氨基末端區(qū)。

7、權(quán)利要求1的DNA建造，其中所說的核苷酸順序編碼因子Ⅶ。

8、權(quán)利要求7的DNA建造，其中所說的核苷酸順序的至少一部分順序是從cDNA克隆或者從因子Ⅶ染色體組克隆中誘導(dǎo)出來。

9、權(quán)利要求7的DNA建造，包括第一核苷酸順序，該順序是從cDNA克隆或從因子Ⅶ的染色體組克隆中誘導(dǎo)出來的，第一核苷酸順序又聯(lián)結(jié)到由第一順序下游位置的第二核苷酸順序上，第二核苷酸順序是從因子Ⅶ的c??DNA克隆誘導(dǎo)出來的，聯(lián)結(jié)的順序為蛋白質(zhì)編碼，在血凝方面，經(jīng)活化后，該蛋白質(zhì)與因子Ⅶa有相同的或本質(zhì)上相同的生物活性。

10、權(quán)利要求7的DNA建造，其中所說的核苷酸順序包括圖1b的從bp36到bp1433的c??DNA順序。

11、權(quán)利要求7的DNA建造，其中所說的核苷酸順序包括圖1b的從bp36到bp99的c??DNA序列，下游跟著的順序是bp166-bp1433。

12、重組質(zhì)粒，它能夠整合到哺乳動物宿主細(xì)胞的DNA中，所說的質(zhì)粒包括一個啟動子，其下游接著是根據(jù)權(quán)利要求1-11中的任何一個所說的核苷酸順序，所說的核苷酸順序，其下游跟的是多聚核苷酸信號。

13、用權(quán)利要求12的重組轉(zhuǎn)染的哺乳動物細(xì)胞。

14、一種產(chǎn)生活性蛋白的方法，該蛋白質(zhì)在由因子Ⅶa介入的凝血過程中具有生物活性，該方法包括：

建立哺乳動物宿主細(xì)胞，該細(xì)胞中含有上述權(quán)利要求1-11中任一所述的DNA建造;

所說的哺乳動物宿主細(xì)胞生長在適宜的培養(yǎng)基上;

分離蛋白產(chǎn)物，該產(chǎn)物被所說的DNA建造編碼，DNA建造又是哺乳動物宿主細(xì)胞產(chǎn)生的;以及

活化蛋白質(zhì)產(chǎn)物，產(chǎn)生一種在凝血過程中與因子Ⅶa有相同的生物活性的蛋白質(zhì)。

15、權(quán)利要求14的方法，包括利用編碼二氫葉酸還原酶的基因轉(zhuǎn)染哺乳動物宿主細(xì)胞放大DNA建造，其中適宜的培養(yǎng)基含有氨甲蝶呤。

16、權(quán)利要求14的方法，其中所說的蛋白質(zhì)產(chǎn)物是利用蛋白水解酶與蛋白質(zhì)起反應(yīng)而活化，蛋白水解酶是從因子Ⅻa，因子Ⅸa，激肽釋放酶，因子Ⅹa和凝血酶所組成的組中選出。

17、治療流血失調(diào)的藥物制劑，其中含有根據(jù)權(quán)利要求14制備的蛋白質(zhì)。