[其他]一種制備二肽和胺的加成化合物的方法無效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 86103254 | 申請(qǐng)日： | 1986-05-13 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN86103254A | 公開（公告）日： | 1986-11-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 馬丁·普拉坦;雷霍德·凱勒;默坦·施林曼 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 赫徹斯特股份公司 |
| 主分類號(hào)： | C07K5/06 | 分類號(hào)： | C07K5/06;C07C101/00 |
| 代理公司： | 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利代理部 | 代理人： | 顧柏棣,辛敏忠 |
| 地址： | 聯(lián)邦德國6*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 制備 二肽 加成 化合物 方法 | ||
已知蛋白酶不但可催化肽鍵的水解裂解，而且還可催化氨基酸衍生物肽鍵的結(jié)合而形成二肽。德國公開專利2，801，238（美國專利4，165，311、4，256，836和4，436，925號(hào)）描述了加成物的制備方法，該化合物一方面是由-N保護(hù)的單氨羧酸酯而另一方面說是由二肽組成，亦即由該單氨羧酸酯及單氨雙羧酸在一酶促酯化反應(yīng)中制備。加成化合物不溶于反應(yīng)介質(zhì)并被提出。但該反應(yīng)的實(shí)際目的不是合成加成化合物而是未保護(hù)的二肽本身。幾種文獻(xiàn)中所描繪的方法，其中包括上述德國公開專利，涉及到分解加成化合物而得到二肽。
出人意外的是，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了在反應(yīng)介質(zhì)中存在胺的情況下，酶促N保護(hù)天冬氨酸與苯丙氨酸甲酯的反應(yīng)中產(chǎn)生的二肽形成了少量可溶性鹽。這個(gè)反應(yīng)的產(chǎn)生比按上述德國公開專利所描述的具有L-、D-或D，L-苯丙氨酸甲酯的加成產(chǎn)物的形成還快。
因此，本發(fā)明涉及：
1.一種新型的具有通式Ⅰ胺的二肽加成化合物，
其中R是氨基保護(hù)基，Y是沒有α羧基或其衍生物的胺。
2.一種制備上述通式Ⅰ化合物的方法，其中R是氨基保護(hù)基，Y是氨基化合物，通過通式Ⅱ化合物
與L-苯丙氨酸甲酯在水介質(zhì)中，以存在蛋白酶及適宜酶活的PH范圍為條件的反應(yīng)，它含有被用作Y的沒有α羧基及其衍生物的胺。
本發(fā)明在下文中將進(jìn)行更詳盡的描述并于權(quán)利要求書中加以限定。
化學(xué)反應(yīng)由下式表示：
很明顯，在這個(gè)反應(yīng)中，應(yīng)用一氨基保護(hù)基團(tuán)保護(hù)天冬氨酸的氨基。最好是氨基甲酸乙酯類的基團(tuán)，特別是芐酯基或叔丁氧羰基。
天冬氨酸衍生物能夠作為有機(jī)堿使用，在其存在的情況下，與L-、D-和（或）D，L-苯丙氨酸甲酯，通式為H3-nNR′n的胺類酶促下反應(yīng)，H3-nNR′n中的：
a）n是1、2或3以及
b）R′為相同的或不同的烷、環(huán)烷、芳烷或芳香基團(tuán)，最好具有至多18個(gè)碳原子，它們中的至少一個(gè)具有至少6個(gè)碳原子，它可能表現(xiàn)為2或3個(gè)R′基形成一個(gè)環(huán)，并在適宜的地方包含氮原子，以及
c）它的可溶于水的羧酸或無機(jī)酸鹽。
最適用的化合物是那些R′為相同的或不同的具有6～8個(gè)碳原子的烷、環(huán)烷或芳烷基的化合物，或者那些2～3個(gè)R′基與氮原子一起形成一個(gè)具有多至10個(gè)碳原子的飽和或不飽和的環(huán)狀化合物。例如將在下文中提到的苯甲胺、二苯甲胺、雙（氨甲基）苯類，象3-氨基甲芐胺、對(duì)氨基苯-2′-乙胺、喹啉和二環(huán)化己胺。此外，也可用通式為NR′4X的季氨鹽代替胺，其中X是酸根。
反應(yīng)也可在緩沖或不緩沖的水性介質(zhì)中進(jìn)行。緩沖液的PH范圍對(duì)應(yīng)于酶的活性范圍。0.05～1mol濃度的緩沖液最好，尤其是0.1～0.5mol。天冬氨酸衍生物和苯丙氨酸甲酯相對(duì)于反應(yīng)介質(zhì)的重量濃度為1～25%。組分的摩爾比在20∶1～1∶50之間，但最好是5∶1～1∶5之間。過量的苯丙氨酸酯，例如當(dāng)使用外消旋起始物時(shí)用D-酯類，令人驚奇地并沒有干擾，因?yàn)檎缫呀?jīng)發(fā)現(xiàn)了的那樣，與胺的加成反應(yīng)比和過量的苯丙氨酸酯的反應(yīng)快得多。
本發(fā)明中所用的胺能夠以與二肽等摩爾量加入。一般說來，較好的結(jié)果取決于過量的程度，特別是1～50倍，最好是2～5倍摩爾過量。胺可以游離化合物或鹽，尤其是鹽酸鹽或硫酸氫鹽的形式應(yīng)用。
催化該反應(yīng)的酶是蛋白酶或含金屬蛋白酶，例如：α-胰凝乳蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、胃蛋白酶或胰蛋白酶，它們可單獨(dú)或混合使用。該反應(yīng)所用酶量在每毫摩爾起始化合物5U-30，000U范圍內(nèi)，最好是50U～10000U。反應(yīng)溫度為4～50℃，最好是35～40℃，并取所用酶的最適PH，一般為PH5～7。保溫時(shí)間2～80小時(shí)，最好是20～30小時(shí)。
本發(fā)明的加成化合物隨后用已知方法降解，從而獲得游離二肽。據(jù)此便可極便利地得到L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯。
本發(fā)明方法使得加成化合物的形成比在前述德國公開專利中所描述的過程產(chǎn)生得更快。而且，將用過的胺作為加成化合物裂解中的無機(jī)酸鹽提出，并與強(qiáng)堿一起從此溶液中游離出來，即可容易地回收加成化合物?？?!-- SIPO
下述實(shí)例將本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)敘述。百分比為重量百分比。
實(shí)例1：
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