[其他]人參植株再生法

無效

• 申請號: 86106832
• 申請日: 1986-08-29
• 公開（公告）號: CN86106832A
• 公開（公告）日: 1987-03-11
• 發明（設計）人: 春日久男;貴志豊和
• 申請（專利權）人: 武田藥品工業株式會社
• 主分類號: A01G7/00
• 分類號: A01G7/00
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 羅宏,盧新華

本發明涉及用組織培養產生人參再生植株的一種方法。

人參（Panax????ginseng????C.A.Meyer）的根，是一種重要的中藥，長久以來被認為是一種卓有成效的健胃藥或（和）滋補藥，目前仍是一種貴重藥材，且需求量大。這不僅因為人參受地理分布限制，也因為人參栽培上的不利因素，例如，栽培期長和易感多種病害。已開展了旨在解決這些問題的人參育種工作。過去若干年的人參組織培養研究是為了其繁殖和育種材料的生產。最近已報道，通過人參分離塊的愈傷組織誘導、愈傷組織繁殖、不定胚（體細胞胚或胚狀體）誘導以及其后的再生，產生人參的再生植株。〔Theoretical????and????Applied????Genetics，57，133-135（1980）;Nature，284，341-342（1980）〕

但是，應用所報道過的方法，使用各種人參分離塊進行有效性試驗并不產生再生植株。因此，這種方法既不能通用又不能重復。所以，理想的辦法是創建一種能高度通用和能重復的人參再生植株生產方法。

在從事用產生人參再生植株常規方法改善栽培條件時，發明者發現，在不含有2，4-二氯苯氧基乙酸（以下簡稱2，4-滴）但含有低濃度的無機鹽或（和）10-40毫克/升細胞激動素的一種培養基中誘導不定胚，不但能完成不定胚的誘導，也能實現植株再生。使用含有低濃度無機鹽的培養基能加速再生過程。本發明 就是在此事實基礎上研究出來的。

也就是說，本發明涉及：（1）它是通過人參分離塊的愈傷組織誘導、愈傷組織繁殖、不定胚誘導以及其后的再生產生人參再生植株的一種方法，其特點是不定胚的培養基不含2，4-滴，而是含有低濃度的無機鹽或（和）10-40毫克/升的細胞激動素。（2）如（1）中所述產生人參再生植株的方法其特點是繁殖培養基含有低濃度的無機鹽。

本方法的具體做法是：在人參分離塊進行愈傷組織誘導、愈傷組織繁殖和不定胚誘導時，使用不含有2，4-滴而含有不是低濃度的無機鹽或（和）10-40毫克/升的細胞激動素的培養基上誘導不定胚，然后用常規方法再生。

本方法的每一具體步驟詳述如下。

（A）分離塊

用組織培養等常規方法制備人參分離塊。雖然人參年齡并非關鍵，但推薦使用1-6年的人參。在本發明中，使用的參齡以發芽后0至1或2周的人參最為有利。制備分離塊要取自人參茁壯發育部位，如根、子葉、（下）胚軸和小葉。用根、子葉等制備分離塊尤佳。使用2年或更老的人參時，建議用小葉等制備，尤其應采用正在張開的或剛張開的小葉。

更具體地說，所用的人參部位要先用水充分清洗。在清洗中可使用磨光粉或表面活性劑，如Tween????20（Kao????Atlas）。在清洗過程中也可采用浸洗等法。在用水清洗后，將清洗過部分加以消毒。能使用的消毒劑包括堿金屬次氯酸鹽，如次氯酸鈉和次氯酸鉀，堿土金屬次氯酸鹽，如次氯酸鈣，醇，如50～100%（W/V）的乙醇），氯化汞，轉化皂，Tween????20，氯胺和過氧化氫水。這些消毒劑可以單獨使用，也可2種或多種混合使用。若需要這些消毒劑可用于適合溶劑的溶液中，例如可用于去離子水和蒸餾水。用常規方法完成消毒，如沖洗、浸漬沖洗、噴霧和攪拌。在這些方法中推薦使用浸漬沖洗及其相似的方法。根據人參部位、污染程度、消毒劑類型和消毒方法這些因素，合適地確定消毒劑的應用條件，如濃度和處理時間。建議用無菌水等徹底將人參消毒部份的消毒劑洗凈。更具體地說，將乙醇和次氯酸鈉溶液均作為消毒劑時，把要利用的人參部位先浸在70%（W/V）的乙醇中達5-60秒鐘，在消毒水中浸漬沖洗1～5分鐘，然后浸在0.5～10%（W/V）的次氯酸鈉水溶液中達2～60分鐘。之后，用消毒水沖洗2～5次，每次沖洗時間為5～10分鐘。在對人參的子葉或小葉進行消毒時，這種方法有能使人參器官得以消毒而無組織損傷，因而是卓有成效的。換言之，建議所利用的子葉或小葉，在如上所述，在70%（W/V）乙醇中浸漬后用消毒水沖洗，然后在3～10%（W/V）過氧化氫水中浸漬消毒10～60分鐘后用消毒水漂洗。如果使用上述方法有困難，例如用根作分離塊時，則在下一階段的愈傷組織誘導過程中，在培養基中添加濃度為10～100毫克/升的抗生素如鏈霉素，這樣就有可能使器官得到消毒。建議在按上述方法將人參消毒之后，本發明的一切工序均應在無菌條件下完成。