[其他]回收人外周血白細(xì)胞的單克隆抗體及其方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 86107203
• 申請(qǐng)日: 1986-10-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN86107203A
• 公開(kāi)（公告）日: 1987-09-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肯尼思·H·科特里特;戴維德·E·霍夫海茵茨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 科特公司
• 主分類號(hào): C12N15/00
• 分類號(hào): C12N15/00;G01N33/577;A61K39/395
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利代理部
• 代理人: 辛敏忠

本發(fā)明是關(guān)于一種鼠的單克隆抗體，這種抗體特別適用于檢測(cè)無(wú)紅細(xì)胞溶解的循環(huán)外周血中的白細(xì)胞亞型。其次，本發(fā)明的目的在于提供一套改進(jìn)的檢測(cè)方法，即利用被該單克隆抗體包裹的適宜單分散微球體來(lái)回收人血樣品中的白細(xì)胞。

用對(duì)細(xì)胞或組織的抗原決定族具有特異性的單克隆抗體包被支持物或微球體，通常將這些支持物或微球體用于檢測(cè)和診斷。這些都在先有技術(shù)中記載了。

為了將所選的細(xì)胞群體分類并使之與異源細(xì)胞群體分開(kāi)，磁性粒子或微球體的使用也是眾所周知的。Senyei等人的專利4，230，685，Graver的專利3，970，518，4，018，886和4，115，535，Davis的專利4，177，253，Molday的專利4，452，773，Gerlinski的專利4，454，234和Rernbaum的專利4，267，234都僅為這種技術(shù)的一些例子。Smilh等人的4，272，510和Forrest等人的4，141，687講授過(guò)用磁性粒子達(dá)到檢測(cè)目的的儀器。在挪威，奧斯陸的Sintef根據(jù)專利合作條約（PCT）提交的公開(kāi)國(guó)際專利申請(qǐng)中也描述了磁性微球體對(duì)細(xì)胞分離的應(yīng)用，其PCT申請(qǐng)?zhí)枮?3/00014，1983年4月22日提交，國(guó)際公布號(hào)為WO83/03920，1983年11月10日公布及PCT申請(qǐng)?zhí)枮?3/00016，1983年4月27日提交，國(guó)際公布號(hào)為WO84/02031，1984年5月24日公布。然而，申請(qǐng)人不知道單克隆抗體可成功而精確地用于從人的外周血樣中分離白血細(xì)胞亞型。

人的循環(huán)血是由細(xì)胞和液體成分所組成的。細(xì)胞成分包括紅細(xì)胞（紅血細(xì)胞）、血小板和白細(xì)胞（白血細(xì)胞）1毫升正常全血樣品中含有5×10⁶紅細(xì)胞，3×10⁵血小板和5×10³白細(xì)胞。白血細(xì)胞群體又分為5個(gè)亞型或群體，稱為中性白細(xì)胞，嗜曙紅細(xì)胞，嗜堿細(xì)胞，單核白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。在白血細(xì)胞數(shù)為5×10³的人血樣品中，每毫升血含有3，075個(gè)中性白細(xì)胞，150個(gè)嗜曙紅細(xì)胞，25個(gè)嗜堿細(xì)胞，250個(gè)單核白細(xì)胞和1500個(gè)淋巴細(xì)胞。淋巴細(xì)胞由8種不同的類型組成，表明有幾種功能的種類存在。已知大多數(shù)控制人體內(nèi)抗體產(chǎn)生并為抗體的產(chǎn)生作準(zhǔn)備的細(xì)胞都是在稱為淋巴細(xì)胞的白細(xì)胞群體中發(fā)現(xiàn)的。此外，經(jīng)鑒定淋巴細(xì)胞亞型的數(shù)目很多。

容易看出對(duì)血樣中白細(xì)胞群體的透徹分析是一個(gè)有用的診斷工具。獲得這樣的資料的常規(guī)方法包括自動(dòng)化電子白血細(xì)胞分類儀，機(jī)械，電子和光散射細(xì)胞計(jì)數(shù)技術(shù)。這種昂貴儀器的使用在經(jīng)濟(jì)上受到一定的限制。此外，在無(wú)特異的單克隆抗體和特殊技術(shù)的情況下，不能用這樣的方法來(lái)確定白細(xì)胞亞型。這也適用于熒光型技術(shù)的應(yīng)用。某些先有技術(shù)也需要紅血細(xì)胞的初溶。

還已知紅血細(xì)胞（紅細(xì)胞）缺少多數(shù)細(xì)胞器，而只有一個(gè)單層膜，即原生質(zhì)膜。幾乎所有細(xì)胞質(zhì)成分都能通過(guò)滲透溶血作用釋放出來(lái)，從而提供“血影細(xì)胞”，這種血影細(xì)胞是相當(dāng)純的原生質(zhì)膜。通過(guò)已知的染色技術(shù)確定紅血細(xì)胞膜含有幾種富含碳水化合物的蛋白。此外，已確定這些蛋白是細(xì)胞表面蛋白。

紅細(xì)胞含有一種跨膜蛋白，經(jīng)鑒定是血型糖蛋白A，這個(gè)蛋白由16個(gè)寡糖和一條單肽組成。大約60%的糖蛋白主體是碳水化合物并且這些碳水化合物單位都位于細(xì)胞膜的外表面。由于血型糖蛋白A富含碳水化合物，因而使得它能夠很好地著色。蛋白水解的化學(xué)修飾和電鏡研究表明血型糖蛋白A具有（1）一個(gè)含有所有碳水化合物的氨基末端區(qū)，該區(qū)位于膜的外表面，（2）一個(gè)埋藏在烴中心的疏水中區(qū)和（3）一個(gè)位于細(xì)胞內(nèi)并構(gòu)成多肽鏈的羧基末端區(qū)。在分子氨基末端部分的碳水化合物單位富含帶負(fù)電荷的唾液酸基團(tuán)。

血型糖蛋白B，也叫糖蛋白δ，是與Ss同種抗原結(jié)合的糖蛋白。29位上蛋氨酸或蘇氨酸的存在表明該同種抗原的區(qū)別。看來(lái)至今只有血型糖蛋白B的氨基末端部分已序列化了。血型糖蛋白C與稱為糖蛋白β和γ的一些成份有關(guān)。

構(gòu)成紅細(xì)胞血型糖蛋白的糖蛋白鏈可作為同型和雜二聚體存在，同型和雜二聚體在聚丙烯酰胺電泳（PAGE）之后具有特征帶，應(yīng)該注意可以進(jìn)一步根據(jù)糖基化和唾液酸化的類型及其程度的不同來(lái)描述血型糖蛋白。