[其他]一種生產2-酮基-L-古洛糖酸的方法

無效

• 申請號: 86107277
• 申請日: 1986-10-21
• 公開（公告）號: CN86107277A
• 公開（公告）日: 1987-07-15
• 發明（設計）人: 野上昱雄;白藤英夫;岡正秀;山口高正
• 申請（專利權）人: 武田藥品工業株式會社
• 主分類號: C12P7/60
• 分類號: C12P7/60;//
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 辛敏忠

本發明涉及一種生產2-酮基-L-古洛糖酸的方法，而該產物能夠作為合成L-抗壞血酸的中間體，還涉及到用于該生產方法的擬葡糖酸桿菌（Pseudogluconobacter）屬菌株。

可作為合成L-抗壞血酸的中間體的2-酮基-L-古洛糖酸在此以前已采用Reichvtein所建立的方法進行過商業生產〔Helvetica????Chimica????Acta????17，311（1934）〕。然而，這種方法包括許多步驟，需要大量的溶劑，因此，它作為一個現代技術是不能令人滿意的。作為其替代方法，已經有幾種主要利用微生物的方法被提出。例如，方法之一包括利用一種微生物將葡萄糖氧化成5-酮基-D-葡糖酸，再利用化學的或微生物學的方法將其還原為L-艾杜糖酸，然后利用微生物學的方法進一步將其氧化成2-酮基-L-古洛糖酸〔美國專利號2，421，611〕。另一已知方法包括利用一種微生物將葡萄糖氧化成2，5-二酮基-葡糖酸，然后通過微生物學的或化學的方法將其轉變成2-酮基-L-古洛糖酸〔日本專利公布號39-14493，53-25033，56-15877和59-35920〕。

但是，這些已知方法中的化學還原步驟（即前一方法中的5-酮基-D-葡糖酸還原為L-艾杜糖酸以及后一方法中的2，5-二酮基-D-葡糖酸還原為2-酮基-L-古洛糖酸）在立體專一性（Stereo-specibicity）方面具有缺點，因此，前一方法中的副產物D-葡糖酸以及后一方法中的副產物2-酮基-D-葡糖酸的產生導致所需化合物的產量減少。而且，即使利用微生物使上面的還原得以進行，整個產物的產量也要下降，因為必須供給微生物以過量的葡萄糖（起始物）作為還原作用的能源。而在這方面，利用L-山梨糖作為起始物生產2-酮基-L-古洛糖酸僅僅包括一個氧化步驟。實際上，人們按照這一方向業已試圖利用屬于葡糖酸桿菌屬，假單胞菌屬，沙雷氏菌屬，無色桿菌屬以及產堿菌屬的細菌。其參考文獻包括：《生物技術與生物工程》，14卷，799頁（1972），Acta????Microbvologica????Sinica，20，246（1980）和21，185（1981），日本專利公布號41-159和41-160，美國專利號3，043，749和日本專利公布號49-39838。

但是，利用在文獻中提到過的菌株獲得的結果實際上是不令人滿意的且生產量太低而不能保證它們的商業開發。

在這種情況下，本發明人極力尋找一種適用于商業生產的生產2-酮基-L-古洛糖酸的方法，且發現從土壤樣品中分離出的一種細菌株K591s（儲存在和歌山縣）以及另一些從土壤樣品中分離出的細菌株12-5，12-15，12-4和22-3（儲存在滋賀縣）能夠以比原來高得多的產量將L-山梨糖轉變為2-酮基-L-古洛糖酸。而且，通過分類學研究，本發明人發現這些都是在文獻中沒有提到過的新細菌。在上述發現的基礎上，本發明有進一步的發展。

這樣，本發明涉及：（1）一種生產2-酮基-L-古洛糖酸的方法，包括將一種能夠使L-山梨糖氧化成2-酮基-L-古洛糖酸的擬葡糖酸桿菌屬的細菌（可以直接用這種細菌或者細菌先經過處理）與L-山梨糖接觸，以產生和積累2-酮基-L-古洛糖酸，然后收集它;（2）一種生產2-酮基-L-古洛糖酸的方法，包括在至少一種下列微生物存在的條件下將一種擬葡糖酸桿菌屬的微生物（能夠將L-山梨糖氧化成2-酮基-L-古洛糖酸）與L-山梨糖接觸，這些微生物屬于芽孢桿菌屬，假單胞菌屬，變形菌屬，檸檬酸細菌屬，腸桿菌屬，歐文氏菌屬，黃單胞菌屬，黃桿菌屬，微球菌屬，或埃希氏菌屬;（3）產酮糖擬葡糖酸桿菌（Pseudogluconobactersaccharoketogenes），它是需氧的且在輔酶A存在的條件下生長。

上面提到的五種細菌株中，菌株K591s和12-5具有下列分類學特征。

（a）形態學特征

（1）桿狀，其大小為0.3～0.5×0.7～1.4微米

（2）無細胞多形態性

（3）靠2至4根極生鞭毛游動

（4）不形成孢子

（5）革蘭氏陰性

（6）不抗酸

（b）培養特征

（1）營養瓊脂平皿：基本上不生長

酵母浸出物營養瓊脂：圓形，邊緣整齊、表面光滑，呈乳光。

（2）酵母浸出物營養瓊脂斜面：適度生長且是線狀的，光滑，乳光。

（3）酵母浸出物營養液體培養：適度生長，整個培養基均勻混濁。

（4）營養白明膠穿刺：表面稀疏生長，白明膠未液化。