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[其他]新的重組基因及其應(yīng)用無效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 86107809 申請日: 1986-11-15
公開(公告)號: CN86107809A 公開(公告)日: 1987-07-15
發(fā)明(設(shè)計)人: 菊地正和;中浜一雄;丸本龍二 申請(專利權(quán))人: 武田藥品工業(yè)株式會社
主分類號: C12N15/00 分類號: C12N15/00;C12P21/02;A61K37/02
代理公司: 中國專利代理有限公司 代理人: 羅宏,曹恒興
地址: 日本大阪*** 國省代碼: 暫無信息
權(quán)利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 重組 基因 及其 應(yīng)用
【說明書】:

本發(fā)明涉及一些編碼像藥劑等一樣適用的沙雷胃蛋白酶(國際非專利名稱)的或編碼具有像沙雷胃蛋白酶一樣的具有抗炎性的多肽的DNA及其使用。

常規(guī)生產(chǎn)像抗炎劑等一樣適用的沙雷胃蛋白酶的方法包括培養(yǎng)沙雷氏(Serratia)菌在內(nèi)的方法(參閱美國專利3691014號)然而沙雷胃蛋白酶基因未曾被克隆,故一直采用基因技術(shù)生產(chǎn)沙雷胃蛋白酶。

使用基因增殖作用可望在用培養(yǎng)沙雷氏菌生產(chǎn)沙雷胃蛋白酶時會提高沙雷胃蛋白的酶的產(chǎn)量。另外有人認為減少用沙雷氏菌生產(chǎn)沙雷胃蛋白酶同時產(chǎn)生的像DNA酶之類的蛋白質(zhì)可簡化沙雷胃蛋白酶的純化過程。

本發(fā)明者發(fā)現(xiàn),帶有含有從產(chǎn)生沙雷胃蛋白酶的沙雷氏菌Serratia染色體DNA而得的沙雷胃蛋白酶基因的克隆DNA的質(zhì)粒的一個轉(zhuǎn)化株,能生產(chǎn)顯著數(shù)量的沙雷胃蛋白酶和一種具有像沙雷胃蛋白一樣的抗炎性的多肽。

本發(fā)明人根據(jù)這些發(fā)現(xiàn)作了進一步的研究,并推進了本發(fā)明。

本發(fā)明提供一種編碼沙雷胃蛋白酶多肽或編碼具有像沙雷胃蛋白酶一樣的抗炎劑性的一種多肽的一種DNA,一種含有上述DNA的質(zhì)粒,一種帶有上述質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化株,一種具有圖3(Ⅶ)所示的,從第(1)-(470)位的氨基酸順序的、其N末端可能有蛋氨酸的多肽,以及提供了它們的生產(chǎn)過程和使用情況。本發(fā)明還進一步提供出一種DNA,它具有的堿基順序表示如下式:

ATG????TCT????ATC????TGT????CTG????ATT????GAT????ATC????AAT

CAG????GTA????ATG????AGT????GGA????ATC????GAA????CCA????ATG

CAA????TCT????ACT????AAA????AAG????GCA????ATT????GAA????ATT

ACT????GAA????TCC????AAC????TTC????GCG????[Ⅷ]

或上述堿基順序的一部分,

一種以下式表示的多肽:

蛋-絲-異-半-亮-異-天-異-天酰-谷酰-纈-蛋-絲-甘-異-谷-脯-蛋-谷酰-絲-蘇-賴-賴-丙-異-谷-異-蘇-谷-絲-天酰-苯-丙????〔Ⅸ〕

上述多肽的一部分,或是一種在上述多肽或上述部分多肽取代,插入,添加或者消去某些氨基殘基而成的多肽,以及利于用它來生產(chǎn)像蛋白酶之類的重組蛋白質(zhì)的生產(chǎn)及其使用情況。

至于編碼沙雷胃蛋白酶多肽密碼的或者編碼具有像上述沙雷胃蛋白酶一樣的抗炎性的多肽密碼的DNA,可以列舉的有:一種DNA是與具有式(Ⅰ)堿基順序的DNA雜交;或者還有另一種DNA是與具有式(Ⅱ)堿基順序的DNA雜交,

5′ACTTTGTAX1CCGTCCCAX2G

TTTGGTTTTC3′[Ⅰ]

式中,X1表示T或G,X2表示T或G,

5′TCY1TGY2CCY3TGCCA3′[Ⅱ]

式中,Y1代表T或C,Y2代表A,G,T或C,Y3代表T或C。

還可作實例說明的是具有圖3所示,其5′-末端上有ATG及其3′-末端上有TAA,TAG及TGA三種以外的一種或兩種終止密碼子〔Ⅲ〕的第731至2236位堿基順序的一種DNA,以及另一種具有圖3所示的其中 5′-末端上有ATG或氫原子及其3′-末端上有TAA,TAG及TGA三種以外的一種或二種終止密碼子〔Ⅳ〕的第827~2236位堿基順序的DNA。這種DNA〔Ⅳ〕亦可有其5′-及3′-末端堿基順序如在圖3〔Ⅴ〕所示的第1-2570位一樣的堿基順序。這些DNA也可是上述堿基順序的一部分,或是從上述堿基順序中,或其中的一部分的堿基順序中取代,插入,添加或消去某些堿基獲得的一堿基順序。

上述這種DNA可以編碼含有下式的一個氨基酸順序的多肽的密碼:組-谷-異-甘-組-丙-亮-35至45氨基酸殘基-甘-天-天酰-甘-甘-組-酪--70至80氨基酸殘基-亮-天酰-谷-賴-絲-苯-絲-天-纈-甘-甘,

或可編碼含有從上述氨基酸順序中取代,插入,添加或消去某些氨基酸殘基而得的一個氨基酸順序。

前面指出的這種取代,插入,添加和消去作用是例如以下的方法:

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