[其他]細(xì)胞熔合裝置

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 86108459
• 申請(qǐng)日: 1986-12-11
• 公開（公告）號(hào): CN86108459A
• 公開（公告）日: 1987-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 望月崇孝;戶田健三;古賀守;十川好志;高山慎一郎;今井克行
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 株式會(huì)社島津制作所
• 主分類號(hào): C12N15/00
• 分類號(hào): C12N15/00
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利代理部
• 代理人: 李強(qiáng)

本發(fā)明涉及通過施加電激勵(lì)熔合細(xì)胞的裝置。

一般地，該裝置包括圍在一對(duì)分開的電極周圍的腔室，在上述電極之間置有含兩種不同的待熔合細(xì)胞的懸浮液，電激勵(lì)源，通過電極向細(xì)胞施加電激勵(lì)的裝置，和用于控制加給細(xì)胞的電激勵(lì)的控制器。

以交流（AC）場(chǎng)和直流（DC）脈沖作為電激勵(lì)，而用一對(duì)線或平面電極作為電極。

為使細(xì)胞熔合，首先通過電極向懸浮在置于電極之間的溶液中的細(xì)胞施加AC電場(chǎng)以使相鄰的細(xì)胞表層緊密接觸，然后將相當(dāng)高的電場(chǎng)的DC脈沖加到所述細(xì)胞上將它們?nèi)酆系揭黄稹?/p>

如果使用一對(duì)線電極，會(huì)遇到如下問題：

（1）在電極間的電場(chǎng)強(qiáng)度不均勻，因此要精確地知道到細(xì)胞上的電場(chǎng)的有效強(qiáng)度是困難的。

（2）熔化的細(xì)胞附著在電極上，所以當(dāng)將它們從電極上分開時(shí)，它們會(huì)被損壞或斷開。

（3）發(fā)生多重熔合，即，三或更多的細(xì)胞象珍珠鏈似地連著。

我們還已知道使用在一對(duì)平行平板電極上施加DC電壓以熔合填在電極間的細(xì)胞的裝置，在這種裝置中，除了上面的問題（2）和（3）之外，還存在第三個(gè)問題：相鄰細(xì)胞間的表層接觸程度低，所以熔合速度低。

所以，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供用于熔合細(xì)胞的裝置，它可提供相當(dāng)均勻的場(chǎng)強(qiáng)，這對(duì)細(xì)胞熔合是重要因素，所以可以精確知道加到待熔合的細(xì)胞上的電場(chǎng)的有效強(qiáng)度，并且在其中細(xì)胞不附著到電極上，而在電極間相互緊密接觸，由此實(shí)現(xiàn)單對(duì)細(xì)胞的熔合而不至造成在許多細(xì)胞熔合在一起的多重熔合。

待熔合細(xì)胞懸浮在溶液中，而懸浮液放在熔合室中相對(duì)的電極對(duì)之間的空間中。如果懸浮液的量較少，如0.05ml，則小電極就可滿足，且包圍電極的腔室可以為簡(jiǎn)單的形狀和結(jié)構(gòu)，所以操縱腔室就相對(duì)容易。

然而，如果細(xì)胞懸浮液的量較多，如1ml，則電極間的空間和/或電極的線度必須增加以容納懸浮液。如果電極間的空間增加，加到電極上的電壓必須增加，并導(dǎo)致整個(gè)裝置尺寸的增加。如果電極的線度增加，為了使有限大小的熔合室容納增長(zhǎng)的電極，該電極必須為復(fù)雜的形狀。如果用大尺寸電極，腔室必須增大，使裝置操作變得困難。

所以，本發(fā)明的另一目的是提供小型、并結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單并能容納足夠含待熔合細(xì)胞的懸浮液的熔合室。

通常，當(dāng)施加電激勵(lì)熔合細(xì)胞時(shí)，需要30分鐘達(dá)到完全熔合。在此過程中，環(huán)境溫度和所加電場(chǎng)造成細(xì)胞懸浮液的溫度增高。從而出現(xiàn)蒸發(fā)，造成細(xì)胞懸浮液的滲透壓增加，并引起細(xì)胞的破壞。

所以，本發(fā)明的又一目的是提供可防止細(xì)胞懸浮液過量蒸發(fā)和減少的熔合室。

簡(jiǎn)單地說，本發(fā)明的裝置包括在其中熔合細(xì)胞的熔合室，交流（AC）和直流（DC）電壓源，和用于有效地選擇加到熔合室中的細(xì)胞懸浮液上的AC場(chǎng)和DC脈沖的控制器。

該熔合室包括一對(duì)具有相互離開一定距離的相對(duì)表面的電極，以及在電極間的空間中放著的細(xì)胞懸浮液。針對(duì)細(xì)胞懸浮液中細(xì)胞的大小，電極的相對(duì)表面具有適當(dāng)?shù)拇怪本€度或高度，以防止主要在相鄰電極的上緣處很不均勻的電場(chǎng)對(duì)細(xì)胞的熔合所起的不利影響。電極間熔合室的表面由適當(dāng)材料制成或得到拋光以提供平滑的表面。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，電極包括一對(duì)相互分開一定距離的平行平板電極。

在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，電極包括一對(duì)中空柱狀電極，它們具有較短的軸長(zhǎng)并共軸安置，使外面的電極具有與里面的電極的外表面相對(duì)的內(nèi)表面。兩個(gè)電極的半徑互相接近，以產(chǎn)生象平行平板電極所產(chǎn)生的那樣的很均勻的電場(chǎng)。

在本發(fā)明另一實(shí)施方案中，熔合室具有用來容納細(xì)胞懸浮液的腔和用于容納不同液體的分離腔，并由頂或蓋密封以避免細(xì)胞懸浮液的液體組分的過量蒸發(fā)。

本發(fā)明將參考附圖作詳細(xì)描述。

圖1是本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的示意圖;

圖2是圖1中所示的熔合室沿線Ⅱ-Ⅱ的縱向剖視圖;

圖3是取掉頂蓋的另一形式的熔合室平面頂視圖;

圖4是圖3中用頂蓋密封的熔合室的沿線Ⅳ-Ⅳ的垂直剖視圖;

圖5是第三種形式的熔合室的透視圖;

圖6是圖5所示熔合室沿線Ⅵ-Ⅵ的垂直剖視圖;

圖7是圖5和圖6所示的熔合室的改進(jìn)形的平面頂視圖;

圖8是圖7所示的熔合室沿線Ⅷ-Ⅷ的垂直剖視圖。

需要說明，在圖中各組成部分的相對(duì)尺寸未精確顯示，且為清楚描述而放大了，各部分的尺寸不能在任何意義上用來限制本發(fā)明的范圍。

參考圖1和2，在此顯示了用來熔合細(xì)胞的裝置，它包括熔合室10，和電源12及控制器14。