[其他]利用病毒的殺蟲(chóng)劑及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 86108756
• 申請(qǐng)日: 1986-12-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN86108756A
• 公開(kāi)（公告）日: 1987-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 前田進(jìn)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 前田進(jìn)
• 主分類(lèi)號(hào): A01N63/00
• 分類(lèi)號(hào): A01N63/00
• 代理公司: 中國(guó)專(zhuān)利代理有限公司
• 代理人: 楊鋼

本發(fā)明是所謂的病毒殺蟲(chóng)劑及其制備方法。本發(fā)明的病毒殺蟲(chóng)劑是利用微生物使害蟲(chóng)致病，從而有效地?fù)錅绾头乐魏οx(chóng)。

由于微生物農(nóng)藥對(duì)作物和牲畜無(wú)化學(xué)損害，近年來(lái)，利用病毒使害蟲(chóng)致病，適于有害昆蟲(chóng)細(xì)菌撲滅和防治的病毒殺蟲(chóng)劑引起了人們的興趣。在這些微生物農(nóng)藥中，某些含有核多角體病毒作為有效組分的病毒制劑（在下文中縮寫(xiě)為“NPV”）在美國(guó)市場(chǎng)上已有銷(xiāo)售。例如Ayusawa，F(xiàn)ujiyoshi等在“Hakko????Kogaku”51，351-363（1973）中報(bào)導(dǎo)了細(xì)菌殺蟲(chóng)劑制備工藝的最新情況。Kamizumi和Katagiri分別在“Hakko????kogaku”51????365-374（1973）中報(bào)導(dǎo)了細(xì)菌殺蟲(chóng)劑的利用情況。

然而，由于考慮到上述病毒制劑的生產(chǎn)成本，普通病毒制劑的大量生產(chǎn)遇到了困難，因而用處不大。后來(lái)，人們把人工飼料加到上述病毒制劑中，其制備方法是將加有寄主昆蟲(chóng)NPV的人工飼料加到昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)中，其目的是為了用NPV感染昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)，并讓幼蟲(chóng)和NPV增殖。收集被致病的昆蟲(chóng)，將其磨碎，然后將這粉狀生成物制成制劑。

一般來(lái)說(shuō)，昆蟲(chóng)病毒的作用范圍受到昆蟲(chóng)種類(lèi)的限制，因此，存在的另一個(gè)問(wèn)題是，要得到任何對(duì)各種各樣昆蟲(chóng)具有單一殺蟲(chóng)效力的病毒制劑是不可能的。

因此，為了使病毒制劑能象農(nóng)藥一樣用來(lái)?yè)錅绾头乐魏οx(chóng)，必須克服上述問(wèn)題。

由于上述考慮，本發(fā)明的目的是提供一種能同時(shí)撲滅和防治二種害蟲(chóng)的病毒制劑。其方法是，用確立的昆蟲(chóng)細(xì)胞株得到一種能顯示不同寄主特性的病毒來(lái)制備重組病毒（兩種不同病毒的雜種）。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種重組病毒（上述病毒制劑的有效組分）的生產(chǎn)方法。這種重組病毒的生產(chǎn)能用類(lèi)似養(yǎng)蠶的作法，利用蠶、家蠶（Bombyx????mori）大量生產(chǎn)來(lái)實(shí)現(xiàn)。

一方面，本發(fā)明提供的殺蟲(chóng)劑是以重組病毒作有效組分，重組病毒是用寄主昆蟲(chóng)互不相同，兩種核多角體病毒的菌株混合物相繼感染兩種類(lèi)型的細(xì)胞得到的。所述的兩類(lèi)細(xì)胞中的一種細(xì)胞只允許兩種核多角體病毒中的一種病毒增殖，而另一類(lèi)型的細(xì)胞只允許另一核多角體病毒增殖。

另一方面，本發(fā)明也提供了制備殺蟲(chóng)劑的方法。其方法是用寄主昆蟲(chóng)彼此不同，兩種核多角體病毒菌株混合物感染第一類(lèi)細(xì)胞，第一類(lèi)細(xì)胞只允許一種病毒增殖，培養(yǎng)被感染的第一類(lèi)細(xì)胞，收集形成培養(yǎng)混合物的上清液，用上清液中的病毒感染第二類(lèi)細(xì)胞。第二類(lèi)細(xì)胞只允許另外的病毒增殖，培養(yǎng)被感染的第二類(lèi)細(xì)胞，收集形成培養(yǎng)混合物的上清液。用此上清液中的病毒再次感染單層的第一類(lèi)細(xì)胞，然后，用噬菌斑驗(yàn)定法無(wú)性繁殖上述生成的混合物，得到由遺傳同一病毒菌株組成的重組病毒。接著，將上述重組病毒作為有效組分，制成制劑。或者這樣做，或者是用上述病毒感染幼蠶并讓病毒在其中增植后做成制劑。

為了使人們更容易理解本發(fā)明的殺蟲(chóng)劑及其制備方法，下文中，將用一個(gè)實(shí)例具體說(shuō)明。在實(shí)例中使用蠶、家蠶（Bombyx mori）和煙草地老虎、斜紋夜蛾（Spondoptera Litura）作寄主昆蟲(chóng)的NPV。也就是說(shuō)，在下述方法中，用寄主細(xì)胞衍生出來(lái)的細(xì)胞，二種NPV_S和BmN細(xì)胞從蠶中衍生出來(lái)，而CLS 79細(xì)胞或SF21E細(xì)胞從有關(guān)的煙草地老虎衍生出來(lái)。用蠶的NPVT3菌株和煙草地老虎的NPVOT102菌株制作重組病毒。

首先，蠶的NPVT3菌株和煙草地老虎的NPVOT102菌株混合物感染CLS77細(xì)胞或SF21E細(xì)胞。實(shí)施上述感染的最佳比率是每個(gè)細(xì)胞（m.O.i.5）5個(gè)病毒微粒。然后將感染過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)2至3天。收集培養(yǎng)的細(xì)胞液，用收集的細(xì)胞液感染蠶衍生出來(lái)的BmN細(xì)胞。感染后，將上述細(xì)胞放在培養(yǎng)基上接種，培養(yǎng)三天。

培養(yǎng)后，收集上述培養(yǎng)混合物的上清液，并用上述上清液再次感染單層的CLS79細(xì)胞或SF21AE細(xì)胞。

上述被感染的細(xì)胞含有二類(lèi)混合病毒，一類(lèi)能形成多角包含體，而另一類(lèi)，實(shí)際上，不能形成任何包含體。不能形成任何多角包含體、并且有遺傳同一性的重組病毒能用噬菌斑驗(yàn)定法選擇無(wú)性繁殖后一類(lèi)病毒得到。

當(dāng)用上面制成的重組病毒感染由蠶衍生出來(lái)的BmN細(xì)胞時(shí)，重組病毒在此增殖。業(yè)已證實(shí)，重組病毒菌株能在CLS79細(xì)胞或SF21AE細(xì)胞和BmN細(xì)胞中增殖，上述的CLS79細(xì)胞或SF21AE細(xì)胞是從煙草地老虎中衍生出來(lái)，而B(niǎo)mN細(xì)胞則是從蠶細(xì)胞中衍生出來(lái)的。

為了用上述方法大量生產(chǎn)作為殺蟲(chóng)劑的重組病毒，幾千年來(lái)，蠶已被改進(jìn)為養(yǎng)蠶業(yè)中的馴養(yǎng)動(dòng)物，其使用價(jià)格低廉。