[其他]氯化血紅素的分離和純化

在審

• 申請號: 87101834
• 申請日: 1987-03-12
• 公開（公告）號: CN87101834A
• 公開（公告）日: 1988-01-06
• 發明（設計）人: 漢斯·舒爾茨
• 申請（專利權）人: 巴斯福股份公司
• 主分類號: C07D211/82
• 分類號: C07D211/82
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 辛敏忠

本發明是關于用催化結晶法從水溶液或懸浮液中分離和純化氧化血紅素的方法。而將氯化血紅素從水溶液中結晶析出通常是不可能的。

在傳統的方法中，只能用數量上大到不相稱的大量有機溶劑將氯化血紅素從血液或血紅蛋白中分離出來。這些溶劑已經成為工業生產中費用最高的因素，并且引起環境污染問題。

早在1853年，Teichmann用冰醋酸在氯化鈉存在下作用于血液，得到了以他名字命名的氯化血紅素結晶。后來Schalfejew將這個血液顯微檢測方法發展成為一種生產工藝，至今仍然是傳統的制備氯化血紅素的方法（Ullmann，應用技術化學大全（Encyklopaedie????d.tech.Chemie），第Ⅳ版，11卷，129頁）。在該工藝中，制備1公斤氯化血紅素大約需要800升冰醋酸，此外重結晶還需要5升吡啶，11升氯仿和70升冰醋酸。純氯化血紅素的產量只有理論產量的70%。僅在重結晶過程中，就損失約20%。

其它已知的方法是利用甲醇（歐洲專利-B-68537）、乙醇、必要時加入乙二醇或丙三醇的混合物（丹麥專利-A2526596）、二甲基甲酰胺、甲乙酮或丙酮（生理化學進展80（1912），35）在酸化的血紅蛋白中分離氯化血紅素和珠蛋白。1公斤氯化血紅素需要200至500升上述有機溶劑，得到的還是雜質很多的氯化血紅素。

根據美國專利4，330，463，在血紅蛋白中加入鹽酸，將混合物噴霧干燥，得到的酸性干血用乙醇/甲醇混合物提取若干次，將氯化血紅素提入溶液。用這個方法每公斤氯化血紅素需要1000升以上溶劑。

本發明的目的就是提供一個分離和純化氯化血紅素的方法，該方法不用有機溶劑，并以很高的收率獲得純的氯化血紅素。

我們發現，用本權利要求的方法可以達到這個目的。用本方法，在PH0.5-2.5時，借助于陽離子的、非離子的或兩性的表面活性劑或這些表面活性劑的混合物，將它們作為催化劑，氯化血紅素可以從含有氯化物的水溶液或懸浮液中結晶出來。

一般地說，氯化血紅素得自血紅蛋白，血紅蛋白得自血液。加入催化劑后，由于氯化血紅素的結晶析出，使血紅蛋白分解成氯化血紅素和珠蛋白的平衡向氯化血紅素移動（因而防止了逆反應的發生）。因此，所涉及的方法主要是氯化血紅素從血紅蛋白和珠蛋白混合物中的結晶和分離。

如果將含有鹽酸的稀血紅蛋白溶液加熱，立即分出粘稠的沉淀，該沉淀由變性的珠蛋白混合物組成，即已成為不溶的珠蛋白和血紅蛋白。我們已經發現，在這個處理過程中，將適當的表面活性劑作為催化劑加入，血紅蛋白不會沉淀。而且，出人意外地，以實際上定量的產率形成Teichmann氯化血紅素結晶。一經靜置，結晶就沉淀下來。無色的上層清液由含有鹽酸的純珠蛋白溶液組成。盡管更可取的是在水解前將血紅蛋白溶液稀釋至含有2-8%固體含量（尤其是5%左右），但這不是絕對必需的。水解以及氯化血紅素的結晶在濃溶液中也能發生（如固體含量為15%時），但是反應速度較高，也就是說，如果這樣做，氯化血紅素的分離時間就會變得很短，以致結晶很小，沉淀很慢。但另一方面，用很稀的溶液是不經濟的。

合適的催化劑是前面所述的表面活性劑，即具有疏水和親水基團的表面作用的混合物，陰離子表面活性劑以不同的方式作用。原則上，市場上許多類型表面活性劑都能被使用，在應用非離子表面活性劑時，最好使用分子量大的表面活性劑。為了促進表面活性劑和珠蛋白分離（在氯化血紅素結晶分離后，珠蛋白很容易經中和從母液中沉淀出來），合理的做法是采用這樣的表面活性劑，這些表面活性劑即使在中性PH時仍然留在溶液中。

合適的陽離子表面活性劑的例子是分子中帶有一個或二個長鏈烷基的季銨鹽。特別重要的典型化合物的例子是氯化二甲基-C₈-C₁₈-烷基-芐基銨，例如氯化芐基十二烷基二甲銨、氯化十八烷基三甲銨、氯化芐基三甲銨、氯化芐基十四烷基二甲銨、氯化十六烷基吡啶鎓以及氯化二羥乙基甲基油酰銨。其它例子是具有羥聚醚基團的羥基脂肪胺，例如十八烷基二乙醇胺或十二烷基二聚乙二醇胺，還有氮雜環丙烷和脂肪胺鹽的加成物，2-（脂肪烷基）咪唑啉、2-（脂肪烷基）苯并咪唑和三乙醇胺的脂肪酸單酯。