[其他]多肽，DNA及其應用

無效

• 申請號: 87101862
• 申請日: 1987-03-13
• 公開（公告）號: CN87101862A
• 公開（公告）日: 1987-10-21
• 發明（設計）人: 黑川勉;佐佐田玲子;巖根里;五十嵐貢一
• 申請（專利權）人: 武田藥品工業株式會社
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;C12P21/02
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 顧柏棣,辛敏忠

本發明關系到一人類初級成纖維細胞生長因子（本文中有時稱為“hbFGF”）及用遺傳工程技術產生hbFGF的一種方法。

初級成纖維細胞生成因子（b????FGF）是一種初級多肽激素，主要從腦下垂體分泌，分子量約17，000。首先是作為一種因子分離到，其對例如BALB/C3????T3細胞的成纖維細胞顯示出潛在的生長促進作用。（D.Gospodarowicz：Nature，249，123（1974））。然而，后來發現它幾乎對所有中胚層衍生細胞均顯現出生長促進作用。（D.Gospodarowicz????et????al.：National????Cancer????Institnte????Monograph，48，109（1978）]在另一些細胞中b????FGF的維管活性以及它的細胞生長促進活性表明它可用作病灶治療劑，以及作為血栓形成，動脈狹窄及類似病癥的預防和治療劑的可能性，然而，天然存在的hbFGF量非常少，許多限制使得從人類組織中得到這種因子遇到嚴重困難。因而，hbFGF的氨基酸順序尚未確定。

另一方面，動物產生的b????FGF，（相對人類b????FGF較易得到），已經從例如牛垂體純化得到，其氨基酸順序也已確定。[F.Esch????et????al.：Proceedings????of????the????National????Academy????of????Sciences????of????the????United????States????of????America（Proc.Natl.Acad.Sci.USA），82，650）（1985）]。然而，在這種情況下，大量生產也非常困難。

如上所述，hbFGF的特性氨基酸順序，相關基因，還大部分未弄清楚。因此，為能將它作為藥物使用，迫切需要尋找編碼該因子的基因，研究出一種采用基因工程技術大量生產該蛋白質的方法。

通常，從接近于人類的動物體內得到的蛋白質的氨基酸順序與人類的相應蛋白質具有高度同源性，并且，在大多數情況下，差異的氨基酸是由密碼子點突變衍生而得。因此，很有可能，上述牛b????FGF氨基酸順序推演得到的DNA順序與hbFGF基因的DNA順序某種程度上應非常相似，盡管由于密碼子兼并可能有許多DNA順序。基于這種假設，本發明合成了具有可能的核苷酸順序的b????FGF基因的一部分，用這部分b????FGF基因作為DNA探針從人類細胞中克隆出hbFGF的c????DNA，并構造了一種含有所述hbFGFcDNA的重組DNA。這樣就發現，培養從上述DNA轉化得到的轉化子可以產生hbFGF。本發明者在這些發現的基礎上進行進一步的研究，結果現已完成了本發明。

因此，本發明提供：（1）人類初級成纖維細胞生長因子（Ⅱ），其為一多肽，氨基酸順序如下：

Pro-Ala-Leu-Pro-Glu-Asp-Gly-

Gly-Ser-Gly-Ala-Phe-Pro-Pro-

Gly-His-Phe-Lys-Asp-Pro-Lys-

Arg-Leu-Tyr-Cys-Lys-Asn-Gly-

Gly-Phe-Phe-Leu-Arg-Ile-His-

Pro-Asp-Gly-Arg-Val-Asp-Gly-

Val-Arg-Glu-Lys-Ser-Asp-Pro-

His-Ile-Lys-Leu-Gln-Leu-Gln-

Ala-Glu-Glu-Arg-Gly-Val-Val-

Ser-Ile-Lys-Gly-Val-Cys-Ala-

Asn-Arg-Tyr-Leu-Ala-Met-Lys-

Glu-Asp-Gly-Arg-Leu-Leu-Ala-

Ser-Lys-Gys-Val-Thr-Asp-Glu-

Cys-Phe-Phe-Phe-Glu-Arg-Leu-

Glu-Ser-Asn-Asn-Tyr-Asn-Thr-

Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Thr-

Ser-Trp-Tyr-Val-Ala-Leu-Lys-

Arg-Thr-Gly-Gln-Tyr-Lys-Leu-

Gly-Ser-Lys-Thr-Gly-Pro-Gly-

Gln-Lys-Ala-Ile-Leu-Phe-Leu-

Pro-Met-Ser-Ala-Lys-Ser（Ⅰ）

（2）重組DNA（Ⅲ）其含有編碼人類初級成纖維細胞生長因子（Ⅱ）的堿基順序;