[其他]α干擾素類似物

無效

• 申請號: 87102497
• 申請日: 1987-03-30
• 公開（公告）號: CN87102497A
• 公開（公告）日: 1987-11-11
• 發明（設計）人: 約翰·T·奧洛克林
• 申請（專利權）人: 干擾素科學研究公司
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;C12P21/02;A61K45/02;C07K15/26
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 曹恒興,林玉貞

本發明涉及對許多種天然α干擾素在22和23位上的ARG-ARG或ARG-LYS二元氨基酸部位的蛋白酶專一性有抗性的α干擾素類似物。

在本申請中，標準的干擾素術語于后說明。α干擾素是具有能夠在免疫和結構兩方面不同于其他干擾素的干擾素活性的一個族系的蛋白質。許多α干擾素的順序都是由Pestka（Sci.Am.249（2）∶37-43，1983）給出的。關于干擾素的命名，參閱“Nature”286∶110（1980）和“ASM????News”，50∶68（1984）。

人體干擾素α-2（2A）已知有165個氨基酸組成的一級順序，一般是由二硫橋將CYS????1與CYS????98、CYS????29和CYS????138偶聯。α-2的三個等位變體如下：

（1）LYS????23，HIS????34變體（Goeddel等，Nature，287∶411-416，1980），由KG-1成髓細胞狀細胞得到;

（2）ARG????23，HIS????34變體（Streuli等，Science，209∶1343-47，1980），由白細胞得到;

（3）ARG????23，ARG????34變體（Dworkin-Rastl等，Gene????21∶237-48，1983）

干擾素已經表達在酵母中，但是在該細胞環境中，其對二氨基肽酶活性的易感性并無特殊的識別（Hitzeman等，Science，219∶620，1983;Kramer等，PNAS，81∶367，1984;Dobson等，Nucl????Acids????Res.，11∶2287，1987;Tuite等，EMBO????J.，1∶603，1982;Lee等，NMucl????Acids????Res.，12∶6797，1984;Bowden等，Gene，27∶87????1984）。在異源宿主中，例如在酵母中產生人體α干擾素則是令人極其感興趣的。因為α干擾素不是一種天然酵母產物，它并不確保對由酵母蛋白水解酶引起的反應會具有抗性。

在酵母中已經發現大量的蛋白水解酶（Archstetter等，Arch????Biochem????Biophys.，207∶445-54，1981）。酵母接合信息素α因子表達為由3種酶活性處理的前體蛋白，3種酶活性為：Lys-Arg上的類胰蛋白酶或組織蛋白酶的類B型裂解;由切割肽得到的堿基殘基的羧肽酶類B型裂解;由二肽氨基肽酶A脫Glu-Ala二肽或脫Asp-Ala二肽。假定的切割Lys-Arg的肽鏈內切酶的結構基因（KEX2）已由Julis等分離得到（Julis等，Cell，37∶1075-89，1984）。

Bitter等（PNAS，81∶5330-34，1984年）構建一個融合基因，包括酵母α因子前導物（leader）和一個166-氨基酸α干擾素類似物（IFN-α-Con）。在α因子直接由酵母分泌而干擾素部分未發生內部裂解時，95%以上的干擾素的分泌完整無損，裂解的部位還未確定。

Horwich等（PNAS，82∶4930-33，1985）報導，線粒體蛋白質的前導物肽在整個氨基酸組分中所顯示的堿性令人驚奇。在OTC酸前體的前導物肽的三個位置上，甘氨酸同時取代精氨酸導致由間質蛋白酶切割的前導物肽的斷裂，即使留下8個殘基，其最近1個精氨酸殘基也遠離蛋白水解裂解的部位。其他的研究同樣也認為，遠離裂解部位的氨基酸可以影響蛋白質水解作用（Hurt等，FEBS????Lett.，178∶306-10，1984;Horwich等，EMBO????J.，4∶1129-35，1985）。（（據Horwich推測，精氨酸對由間質酶識別的二級結構或三級結構是有影響的）。這些觀察說明預測修飾多肽順序對蛋白質水解反應易感性的困難。

關于干擾素在其他宿主中的表達也存在著類似問題。據Braude等報導（Biochem.&????Biophys.Comm.，89∶612，1979），主要切割色氨酰基、苯丙氨酰基和酪氨酰基羧基側鏈的蛋白水解酶α胰凝乳蛋白酶可認為是一種特殊失活的干擾素。

已知α干擾素在離體ARG-ARG和ARG-LYS部位上易受胰蛋白酶裂解（美國專利4503035）。即使離體的許多胰蛋白酶裂解部位被確定，而干擾素分子在所有這些部位上的性質究竟有否受到損害仍不清楚。我們發現：22和23位上的部位是在缺乏蛋白酶酵母菌株中發現的新的二氨基肽酶的初級裂解部位，而且該部位上的裂解對生物活性有不利的影響。