[其他]類毒素制備的新方法

無效

• 申請號: 87104279
• 申請日: 1987-06-16
• 公開（公告）號: CN87104279A
• 公開（公告）日: 1988-01-20
• 發明（設計）人: 羅納德D·塞庫拉
• 申請（專利權）人: 羅納德D·塞庫拉
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K39/10
• 代理公司: 上海專利事務所
• 代理人: 張琦霞

本發明涉及類毒素的制備。更具體地說，本發明涉及一種化學滅活，特別是用過氧化氫滅活毒素，并由此制備非細胞的解毒疫苗的新方法。

百日咳是一種由百日咳桿菌引起的傳染病。通過免疫接種可有效地控制這一疾病的發病率。當前國家和世界衛生組織建議嬰兒應進行免疫接種，以預防百日咳的發病和蔓延。

三種類型的疫苗已用于抗百日咳桿菌的免疫接種。最為廣泛使用的疫苗系由全部已不再存活的百日咳桿菌體組成。這種疫苗雖對預防疫病是有效的，但存在下列幾個問題：1）施用后引起局部紅斑，2）疫苗的施用伴隨著誘發高熱、全身性煩躁和不適，3）據稱在某些情況下可引起嚴重的神經病學后遺癥。另一種疫苗是將百日咳組分制備成尿素浸出物的形式。這種制品大約在1969年至1974年期間使用過，但后來已從市場上消失了。在日本，正在使用的一種新的百日咳疫苗系從百日咳桿菌的培養物上清液中制得。這種物質包含所有的培養物上清液蛋白質，由于生物體培養的變異性，最終組成可能不盡相同。此外，使用戊二醛或甲醛作為滅活劑有時會產生易于回復成活性毒素的聚集物。人們認為這些醛導致了席夫堿的生成，后者是化學不穩定物質，因此使類毒素易于回復成活性毒素。用迄今為止所知的方法制備諸如破傷風、白喉、和霍亂毒素之類的其他毒素亦具有類似的弊端。因此，對于一種用來制備基本上無不良組分和效應的既安全又穩定的非細胞性毒素之改進方法的需求是十分明顯的。

因此，本發明的目的在于制備一種用化學方法對其毒素已不可逆地滅活的類毒素。

本發明的另一目的是制備一種無內毒素或其他常易產生有害副作用的毒性物質之類雜質的百日咳疫苗。

本發明的又一目的是提供一種保護易感宿主免遭百日咳侵襲的方法，該法系通過向所述宿主施用按照本發明所制備的致免疫量的抗原而達到上述的保護作用。

隨著以下對本發明的詳細描述，本發明之其他目的和優點將是顯而易見的。

當結合附圖閱讀下述詳細說明時，將能更好地理解本發明的上述和其他目的、特點以及許多附帶的優點，其中：

圖1表示用過氧化氫滅活百日咳毒素的動力學，在方法章節中所述的標準條件下，用過氧化氫處理百日咳毒素。按圖中所指明的時間取出反應混合物（△，□，○）的試樣，并用酶結合免疫吸附劑測定法分析其血細胞凝集活性（△，▲），轉導子腺苷二磷酸-核糖基化活性（□，■）和抗原活性（用ELISA測定法）（○，●）。對于用同樣方法但不用過氧化氫處理的百日咳毒素也進行這些測試（▲，■，●）。通過添加過氧化氫酶使反應終止。

圖2是前類毒素和PTH-06類毒素的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，圖中自左至右的線條（lanes）表明：1-蛋白質標準物;2，3，4-PTH-06的兩倍稀釋液;5-蛋白質標準物;6，7，8-前類毒素的兩倍稀釋液;9-蛋白質標準物。

圖3表示百日咳類毒素的穩定性。用批號為PTH-04的吸附百日咳類毒素，以圖中所示劑量對小鼠進行免疫接種。免疫接種所用的PTH-04是在兩周內配制的（●，■），在4℃下保存了6個月（○，□），在免疫接種后2周（○，●），和4周（□，■），用酶結合免疫吸附劑測定法、CHO細胞抑制、和防御百日咳桿菌體對大腦內的侵襲來測定血清抗體。

本發明的上述和其他目的系通過一種制備類毒素及其疫苗的方法而實現的，其中類毒素的具體制備方法如下：用足以化學滅活其毒素，但保留其致免疫性質量的氧化劑處理至少部分提純或分離的毒素，然后分離出完整的類毒素或其部分。

此處所用的術語“氧化劑”意指能氧化肽鏈某些特定位置上之毒素的任何試劑，而在這些特定位置上產生半胱氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸和/或酪氨酸之類的氨基酸殘基。這類氧化劑可以是有機物或金屬。較佳的氧化劑可列舉如下：過氧化氫、過氧化鈉、N-氯-4-甲基-苯磺酰胺鈉鹽（氯胺-T）、過甲酸、過氧化二噁烷、過碘酸、高錳酸鈉、次氯酸鈉、以及該技術領域中所熟知的其他類似物質。其中尤以過氧化氫為更佳，因其操作容易、價格低、且易于得到。

除特別另行定義外，本文所用的全部科學或技術術語均具有如本發明所屬技術領域中普通熟練人員通常所理解的同樣意義。以下引用的所有參考資料均列在文內，以供參考。雖然文內所述的類似或等同的方法和物質均可用于本發明的實施或文內所提到的試驗，但以下將對較佳的方法和物質進行描述。

本文所用的術語“基本上”提純或分離系指毒素至少已被分離和/或提純至這樣一種程度，以至在類毒素施用到宿主中后無這類可能引起有害反應的微粒狀或可溶性細菌污染物或雜質。