[其他]抗雄性特異抗原的抗體及其制備方法

無效

• 申請號: 87104368
• 申請日: 1987-06-23
• 公開（公告）號: CN87104368A
• 公開（公告）日: 1988-03-23
• 發明（設計）人: 及川胤昭
• 申請（專利權）人: 株式會社生物科學研究所
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 全青,吳大健

本發明涉及抗雄性特異抗原的抗體及其制備方法。

在近交系小白鼠皮膚移植實驗中，發現同性間的移植以及由雌性移植到雄性時不產生排斥，但由雄性移植到雌性時會誘導免疫反應而使移植片全部被排斥（Eichwald，E.J.及Silmser，C.R.1955）。而這是由在Y染色體上的遺傳因子的發現生成物所引起，該生成物含有組織相容性Y抗原，或H-Y抗原，加上其它可能性，而將它命名為雄性特異抗原。

本發明中，將抗雄性特異抗原的抗體稱之為“抗雄性特異抗原”或“雄性特異抗體”。

已知，這種抗雄性特異抗原的抗體，在近交系小白鼠中，可用雄性小白鼠的脾臟或睪丸使雌性小白鼠免疫致敏，再回收后者體內的抗體而制備獲得（Wachtel.S.S.Koo.G.C.，Zuckerman，E，E，Hammerling，U.，Scheid，M.P.及Boyse，E.A.（1974）Proc.Natl.Acad.Sci.U.SA.Vol????71，1215;Utsumi，K，Sato，E，及Yuhara，M.（1983），J.Reprod.Immunol，Vol.5（Sul.1），59）。但是，對于用這種方法制備的抗體的特異性，并沒有進行詳細的研究，特別是沒有提示這種抗體是否能與雄性精子結合。而近????系小白鼠一般是近交系動物通過群體交配培育、維持的，是近交種系，????遺傳因子構成的血緣系數不一定高，因此可以預計，用這種近交系動物制備的抗體的特異性不會太高。

據Proc.Natl.Acad，Sci.USA，Vol????70，N.5、????502-1505，1973的記載，由排斥來自雄性小白鼠皮膚移植后的雌性小????鼠所得之抗血清，是與精子的頭部結合，而本發明之抗體則是與雄性精子的中心體部進行特異結合，因此與本發明之抗體不同。

本發明提供了用極簡單的方法制備特異性高的抗雄性特異抗原（雄性特異抗體）的方法，以及用該法制得的抗雄性特異抗原（雄性特異抗體）。

通過提供一種以與雄性精子中心體部進行特異結合為特征的抗雄性特異抗原的抗體，以及提供一種與雄性精子中心體部特異結合的抗雄性特異抗原的制造方法，達到上述本發明之目的;此方法的特點是摘出雄性動物的細胞、組織或器官，并將其注射到雌性動物體內，再從雌性動物的血液中回收抗體。

通常，實驗動物經過成對交配約20代繼代繁殖時，其血緣系數達到99.8%以上，在這種狀態下，雄性動物及雌性動物，除產生雄性特異抗原的遺傳因子之外，其它各種遺傳因子都具有相同的遺傳基團結構，對這種動物集團稱之為純種系，與群體交配方法繼代的近交系動物不同。因此，一旦建立起這種純系動物，就可以用產生雄性動物的雄性特異抗原的器官（如睪丸等），通過使雌性動物發生免疫致敏這種極其簡單的方法，便能使免疫致敏的雌性動物在血清中產生抗雄性特異抗原的抗體，即抗雄性特異抗原（雄性特異抗體）。

然而，建立上述那種純系時，需要很長的時間和嚴格的管理，操作十分困難。也就是說，為了建立純系必須進行20代以上的成對交配，此處說的成對交配是指由共同雙親生的子動物中僅一對雌雄繁殖，而與其它動物隔離開進行反復培育的方法，這種方法與多對雙親動物一起繁殖的群體交配不同，為了反復繼續繁殖，需要極其嚴格的管理，因此，建立純系時的動物種非常之少。

本發明者通過使動物長年反復成對交配，成功地建立了倉鼠的純系，并以此為基礎完成了本發明。

本發明方法適用于能確立純系的各種動物。列舉如：小白鼠、大白鼠、倉鼠、兔、豬、豚鼠、牛等各種動物種。在本發明中，用本發明者首次建立的倉鼠純系對本發明進行具體說明。該純系是經過8年20代的成對交配建立起來的，它具有99.8%以上的血緣系數。

本發明方法，是通過由含有雄性特異抗原的雄性動物得到的免疫原制備物，使雌性鼠免疫致敏。該免疫原制備物可以用顯現有睪丸、脾臟、腦等雄性特異抗原的細胞、組織或器官制備而獲得，其中以睪丸為理想。對這些細胞、組織或器官，一般采用勻漿處理為最方便。當雌性動物進行免疫致敏時，最好使用作為免疫化補助劑的弗羅因德氏（Freund′s）的完全佐劑等，例如和勻漿等容量使用，頗為滿意。免疫致敏是通過對雌性動物的皮下注射：皮內注射、腹腔內注射或脾臟的直接注入等方法進行。這種免疫致敏以一周的間隔進行5次左右。在最后一次免疫致敏約10日后，采取動物血液，再用從血液中回收抗體的常規方法分離出目標抗體。