[其他]霉菌毒素的測定試劑和測定方法

無效

• 申請號: 87105153
• 申請日: 1987-07-17
• 公開（公告）號: CN87105153A
• 公開（公告）日: 1988-02-03
• 發明（設計）人: 宇田泰三;伊藤幸勝;西村實;一二三惠美;須藤佳壽美;上野芳夫
• 申請（專利權）人: 宇部興產株式會社
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 曹恒興,林玉貞

本發明涉及霉菌毒素的測定試劑和測定方法。特別是涉及含有酶標記的單克隆抗體的霉菌毒素測定試劑及使用該測定試劑進行的測定方法。

由青霉菌、曲霉菌和鐮孢霉菌一類的真菌類微生物產生的霉菌毒素，即使在還未顯示其急性毒性時，他們往往也是致癌毒素或誘發肝腎臟腫瘤的毒素。霉菌毒素中，黃曲霉毒素B₁的致癌力特別強。實際上，黃曲霉毒素B₁對人體和動物體的影響早已進行了充分的研究，而且業已了解黃曲霉毒素B₁是以肝臟作為致癌的靶器官。

因此，在人和動物進食之前，先測定食物和飼料中霉菌毒素的含量，從而防止攝入這些毒素則成為非常重要的問題了。

定量測定霉菌毒素的傳統方法，例如包括：薄板層析法、高性能液相層析法、氣相層析法、質譜法和動物生物測定法。然而在實際應用時，由于測量靈敏度或測量分析所需時間方面困難重重，這些方法受到了限制，為此亟待作進一步的改進。

近來開展了用酶標記黃曲霉毒素B₁和對其有專一性的多克隆抗體進行酶免疫測定的研究[Appl.Enoi.Microbiology，41，1472（1981）]。這個方法在測量靈敏度和測定分析所需時間方面都具有重要的實際意義，但是其測定的靈敏度仍不能滿足需要。此外，由于大量含有霉菌毒素的試劑用后必須廢棄，所以在安全和經濟方面也需要改進。

Ikuko Ueno在日本霉菌毒素理學協會論文集（21期，1985年6月30日）中，公開了黃曲霉毒素B₁的改進酶免疫測定法。該方法使黃曲霉毒素B₁定量測定的精度達到10～1000微微克/10微升（1毫微克/毫升～100毫微克/毫升）。

黃曲霉毒素B₁的連接酶的免疫吸收劑測定法也已為公眾所知[Bhanu P.Ram和L.Patrick Hart：J.Assoc.Off.Anal.Chem，69卷，5期（1986）]。根據該方法，黃曲霉毒素B₁的測定精度也是1毫微克/毫升～100毫微克/毫升。

由A.A.G.Candlirh，W.H.Stimson和g.E.Smith發展的使用對黃曲霉毒素B₁的單克隆抗體檢測霉菌毒素的酶免疫測定法也已為人們所知（Lettors in Applied Microbiology，1985，1，57～61）。采用該方法，黃曲毒素B₁的測定精度約為1～5毫微克/毫升。

上述種種酶免疫測定方法都是非常實用的，因為他們有助于測定分析簡單化，并且在同一時間可測定許多樣品。

但是至今所報導的，還沒有一種酶的免疫測定方法能使黃曲霉毒素B₁的定量測定精度達到小于約1毫微克/毫升。

本發明的目的在于提供一種測定象黃曲霉毒素B₁一類的霉菌毒素的試劑。

本發明的另一個目的在于提供測定霉菌毒素的試劑，能夠對霉菌毒素具有足夠的敏感度并能與其迅速反應。

本發明還有一個目的在于提供一種足夠穩定和經濟的測定霉菌毒素的試劑。

本發明再有一個目的在于提供一種對霉菌毒素的酶標記單克隆抗體，這種抗體可用作具有上述性質的霉菌毒素測定試劑。

本發明的進一步目的在于提供一種用本發明上述霉菌毒素測定試劑，迅速高靈敏度地定量測定霉菌毒素的方法。

本發明的其他目的僅以其本身所具優點，通過如下介紹將會一目了然。

根據本發明，其目的和優點首先是通過測定霉菌毒素試劑包括對霉菌毒素的酶標記單克隆抗體具體體現的。

圖1得到的校準曲線是將OTA-BSA（20微升/毫升）固定到96-井平底免疫測定板上，加入稀釋成不同濃度的霉菌毒素測定試劑，并將各種濃度的標準OTA溶液加入測定板的各個井中，以引起酶的反應，反應終止時，借助微量測定板光度計，在500毫微米處測量測定板上反應溶液的吸光率，繪制出對各種濃度的霉菌毒素的吸光率校準曲線。

圖2得到的校準曲線，其反應條件與圖1相同，只是用T-2-HS-BSA（20微克/毫升）代替OTA-BSA，用標準T-2溶液代替標準OTA溶液。