[其他]微生物培養(yǎng)和檢測的設(shè)備和方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 87106707
• 申請日: 1987-08-28
• 公開（公告）號: CN87106707A
• 公開（公告）日: 1988-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅伊·霍爾布魯克
• 申請（專利權(quán)）人: 尤尼利弗公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/04;G01N33/02
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 林玉貞

本發(fā)明是關(guān)于微生物培養(yǎng)和檢測的設(shè)備和方法，更具體地說是適用于活動(dòng)細(xì)菌，例如沙門氏菌、凱普勒菌屬、李司忒氏菌屬、弧菌屬、氣單胞菌屬、埃希氏桿菌屬的菌種、菌株和血清型的裝置和方法。

上述這些活動(dòng)細(xì)菌，由于其對人和動(dòng)物的病原特性，在食品衛(wèi)生，環(huán)境衛(wèi)生和污染的監(jiān)視，以及用作臨床試樣等方面，是特別重要的主體。

現(xiàn)有的方法，特別是對在食品試樣中沙門氏菌污染所用的檢測方法，既耗時(shí)又費(fèi)力。

一種用于沙門氏細(xì)菌污染（如在食品試樣中）的標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法，包括如下步驟：

（a）：在225毫升含有如細(xì)菌學(xué)胨的“預(yù)濃縮”或“復(fù)蘇”（resuscitation）介質(zhì)中分散25克食品或其它物料的試樣，培育多達(dá)一天的時(shí)間（如在37℃下，培育18-24小時(shí)）;

（b）：把原始培養(yǎng)液再培養(yǎng)在每一種由一種或多種不同形式（例如二種）構(gòu)成的“選擇性濃縮介質(zhì)”中，以抑制與存在的沙門氏菌有關(guān)的其它微生物的生長，通過培育使這些濃縮培養(yǎng)液生長，以得到可以顯示的沙門氏菌（如果存在）;（最少的可顯示的菌的含量可以在很大范圍內(nèi)變化，若不存在其它污染，則為大約每毫升1000個(gè)微生物，在有其它微生物嚴(yán)重污染的情況下，每毫升大約有一百萬以上的微生物或者更多）;

（c）：用所得的濃縮培養(yǎng)液，在一組選擇性不同的固體生長介質(zhì)上接種，通常在瓊脂上接種，在皿上識別出沙門氏菌落（如果在初始的試樣中存在）;

（d）：對任意臨時(shí)識別為沙門氏菌的菌落至少進(jìn)行生物化學(xué)和/或免疫學(xué)（凝集）檢測，以進(jìn)一步證實(shí)或推翻這種識別。

整個(gè)過程大約一周。

近來，發(fā)展了一種改進(jìn)的免疫學(xué)的檢測方法，它可取代標(biāo)準(zhǔn)方法中的步驟（c）和（d），稍微縮短了整個(gè)時(shí)間。

現(xiàn)有技術(shù)中還有一種辦法，即通過一個(gè)選擇性的移動(dòng)系統(tǒng)用以隔絕沙門氏菌（PFStuart和HPivnick（1965），應(yīng)用微生物學(xué)13（3）PP365-372），這種技術(shù)是利用u形管中“半固體”膠體介質(zhì)，在u形管的一側(cè)，接種后將得到細(xì)菌，在其另一側(cè)，在半固體膠體的表面用一取自預(yù)濃縮培養(yǎng)液的樣品作為接種體。

另一種依據(jù)待測微生物活動(dòng)性的技術(shù)如美國專利USP????4563418（生物控制有限公司）所述，該專利描述了一種“活動(dòng)免疫固定方法”（motilityimmunoimmobilisation），用來檢測活動(dòng)的微生物，如沙門氏菌。它還公開了一移動(dòng)容器，其每端開孔，一個(gè)蓋子蓋在每端的開孔上，它包含一種膠凝的移動(dòng)介質(zhì)。采用這種系統(tǒng)時(shí)，在（容器）一端通過置入抗血清來固定與膠凝介質(zhì)相接觸的沙門氏菌，在其另一端，置入含有趨藥性誘引劑（如L-絲氨酸）的選擇性濃縮介質(zhì)和微生物接種體，所說的接種體來自先有的與膠體介質(zhì)相接觸的選擇性濃縮培養(yǎng)液。培育之后陽性結(jié)果由靠近抗血清加入處的管子那端的一部分固定細(xì)菌來指示。

另外有關(guān)（包括移動(dòng)濃縮的內(nèi)容）沙門氏菌的檢測的回顧與說明最近已經(jīng)出版，可見JM????De????Smedt，RF????Bolderdijk，HFRappld和DLautenschlaeger（1986）《食品保護(hù)》，卷49（7）PP510-514，其中提到，轉(zhuǎn)移由預(yù)濃縮培養(yǎng)液得到的接種體，以便在含有Rappaport-Vassiliadis肉湯的半固體瓊脂表面上形成斑點(diǎn)：經(jīng)過24小時(shí)培育之后，在遷移后的細(xì)菌顯現(xiàn)生長的區(qū)域邊緣采集試樣，進(jìn)行再培養(yǎng)，以檢測沙門氏菌的存在。

美國專利USP3704204（Armour和CO）描述了一用于沙門氏菌的快速檢測法，舉例為：用一個(gè)位于介質(zhì)表面上方大約1吋或半?yún)嫉挠靡宜徙U飽和的棉墩，在營養(yǎng)基中培育肉骨樣品，營養(yǎng)基中含有選擇性抑制劑，如膽汁鹽，脫氧膽酸鹽，氧化鋰和吖啶衍生物（吖啶黃素）：在經(jīng)過24小時(shí)培育之后，棉墩發(fā)黑，這視為陽性（可疑）結(jié)果。據(jù)報(bào)導(dǎo)，采用這種方法，盡管沒有錯(cuò)誤的陰性反應(yīng)，但有許多錯(cuò)的陽性反應(yīng)。

雖經(jīng)這些努力，但如何以簡便的方式，縮短活動(dòng)細(xì)菌檢測所需的時(shí)間，特別是在較早的培養(yǎng)階段上，仍存在著問題。

本發(fā)明的目的之一，就是為活動(dòng)細(xì)菌提供檢測裝置和方法，它能使由單個(gè)容器內(nèi)的樣品培養(yǎng)液所獲得的檢測結(jié)果，具有較高的可靠性。

本發(fā)明的另一個(gè)目的，是提供簡便的活動(dòng)細(xì)菌選擇性濃縮培養(yǎng)和檢測的裝置和方法，以簡化和/或減少操作者對樣品和培養(yǎng)液的處理。

一方面，本發(fā)明提供了一種選擇性培養(yǎng)活動(dòng)細(xì)菌的方法，包括的步驟是：

（a）：制備一種懷疑含有活動(dòng)細(xì)菌的物料的細(xì)菌學(xué)培育樣品;