[其他]轉氨酶基因tyrB的克隆和應用

無效

• 申請號: 87106923
• 申請日: 1987-09-18
• 公開（公告）號: CN87106923A
• 公開（公告）日: 1988-06-22
• 發明（設計）人: 魯迪格·馬奎特;約翰·森;翰斯·馬斯亞斯·迪格;格哈德·沃納;馬蒂恩·羅賓森;安德魯·多赫蒂
• 申請（專利權）人: 赫徹斯特股份公司
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;C12N9/10;C12P13/22
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 李瑛

苯丙氨酸合成過程中的最后一步是利用轉氨酶對苯基丙酮酸進行氨基化。雖然，有多種轉氨酶都能通過轉氨作用將苯基丙酮酸變為苯丙氨酸，但細胞中完成這一功能的主要是稱為芳香轉氨酶的酶。在遺傳學中，大腸桿菌的芳香轉氨酶基因的縮寫是tyr????B（Umbarger，Ann????Rev.Biochemistry????47：533-606，1978）。在大腸桿菌K12菌株中，已確切地知道了此基因在“細菌染色體”上的定位，這一基因的產物的酶分類編號被定為2.6.1.5（Bachmann????et????al.，Microbidogical????Rev.44：1-56，1980）。

歐洲專利申請0，116，860號描述了從大腸桿菌K12中分離tyr????B基因及將此氨基轉移酶基因克隆到多拷貝質粒上的方法。將克隆的質粒轉回到最初分離此基因的菌株中，結果能使此菌株的L-苯丙氨酸產量提高大約11%。

現在，已令人驚奇地發現，從ATCC????11303大腸桿菌中分離tyr????B基因，將其克隆到多拷貝質粒上并用此質粒轉化微生物后（尤其是轉化起始菌株），能導致L-苯丙氨酸的產率提高10倍。

因此，本發明涉及：

1.從ATCC????11303大腸桿菌中分離的含有tyr????B基因的一種染色體外復制組分。

2.利用1）中所述的染色體外組分合成芳香氨基轉移酶。

3.利用1）中所述的染色體外組分在微生物中大量生成L-苯丙氨酸，包括

a）.將染色體外組分導入微生物中，

b）.使tyr????B基因在此微生物中表達并合成活性芳香轉氨酶，以及

c）.由此轉氨酶進行苯基丙酮酸的氨基化。

下面的描述和權利要求書分別詳細說明和限定了本發明。

不僅能夠使用野生型大腸桿菌ATCC????11303，還可使用它的變種和突變株。例如，還能夠使用通過已知方法（E.Adelberget????al.，Biochem.Biophys????Res.Comm????18：788，1965）已使之發生變異并通過L-苯丙氨酸的大量生成而選擇出來的菌株。大腸桿菌ATCC????11303的tyr????B基因編碼的芳香氨基轉移酶，主要通過從谷氨酸轉移一個氨基而合成L-苯丙氨酸。除此以外，芳香轉氨酸還能合成酪氨酸、谷氨酸，天門冬氨酸和亮氨酸。異亮氨酸、纈氨酸、亮氨酸，苯丙氨酸和谷氨酸是利用ilv????E基因編碼的轉氨酶形成的，而合成天門冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的轉氨酶是asp????C基因負責表達的。但上述轉氨酸中的每一種，對主要應當由另兩種轉氨酶中的一種負責的氨基酸的合成也表現出較低的活性。