[其他]對中性白細胞特異的單克隆抗體

無效

• 申請號: 87107275
• 申請日: 1987-12-07
• 公開（公告）號: CN87107275A
• 公開（公告）日: 1988-08-17
• 發明（設計）人: 詹姆斯·D·格里芬
• 申請（專利權）人: 達納-法伯癌研究所
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;C12N5/00;C12P21/02;G01N33/577
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 李瑛,顧柏棣

本發明涉及一種可產生結合到中性白細胞群體上的單克隆抗體的雜交瘤細胞系。因此，本發明可通過該單克隆抗體的特異結合能力直接免疫測定人外周血中的中性白細胞，進而可使外周血樣中的中性白細胞選擇性地減少。

人循環系統中的外周血主要由紅血細胞，即紅細胞，和白血細胞，即白細胞所組成。白細胞的功能及其臨床相關性已經引起科學界的極大的興趣。白血細胞由中性白細胞，單核細胞，嗜曙紅細胞，嗜堿細胞和淋巴細胞所組成，白血細胞有許多亞型。

已知中性白細胞，單核細胞，嗜曙紅細胞和嗜堿細胞都是吞噬細胞，因為它們在人免疫系統中的主要功能是吞噬或消化細菌和其它微生物。這些細胞是在人的骨髓中產生的。然而，這些吞噬細胞作為既相關又獨立的系統又各有其不相同的功能。雖然這些吞噬細胞起源于骨髓，但它們都進入外周血中并循環。

吞噬細胞的一般功能是吞噬那些作為外來物被識別的物質并有助于產生對抗外來物的免疫反應。中性白細胞作為吞噬已包被有抗體的細菌的吞噬細胞是很有效的，但對未包被抗體的細菌不那么有效。中性白細胞的主要功能是在病原微生物侵襲后，通過將其限制于局部并殺傷之來阻止病原微生物的侵入。為了成功地攻擊侵入的微生物，中性白細胞將離開外周血，遷移到受侵染的組織區域，然后識別，殺死并消化微生物。

中性白細胞是骨髓中最常見的細胞和外周血中最常見的白細胞。1微升正常全血樣品中平均含有5×10³個白細胞，其中有3，075個是中性白細胞，150個是嗜曙紅細胞，25個是嗜堿細胞，250個是單核細胞，1500個是淋巴細胞。外周血中中性白細胞偏離正常濃度常伴有臨床病變。中性白細胞的濃度增加有時稱為“中性白細胞增加癥”其可以是某種疾病或身體狀況的指征，而外周血中中性白細胞的濃度減小（有時稱為“中性白細胞減少癥”）可出現不同的臨床關聯。例如，中性白細胞絕對計數少于每微升500個細胞時機體便處于一種生命受到威協的狀況下，因為具有這樣異常中性白細胞計數的患者，對危及生命的細菌或真菌感染是高度敏感的。中性白細胞減少癥可能起因于胞毒藥物，如用于治療癌癥或白血病的藥物。還有許多與中性白細胞功能異常相關的先天和后天疾病。外周血中中性白細胞的測定是總的白細胞計數的重要部分。

本發明提供一種雜交細胞系，其可產生對人外周血中性白細胞所表達的表面抗原有特異性的單克隆抗體。經鑒定該表面抗原為1D3抗原，其特征是在處于還原條件下時分子量約為48，000道爾頓，而在非還原條件下則約為48，000～60，000道爾頓。

本發明提供一種可與中性白細胞表面上的抗原位點特異結合的單克隆抗體，該抗原位點被鑒定為1D3抗原，所說的抗-1D3單克隆抗體的進一步的特征是不與人的急性白血癥細胞、其它的人外周血細胞結合，并且不與骨髓中的粒細胞前體形成明顯的結合。

本發明的抗-1D3單克隆抗體是通過雜交瘤細胞系產生的，參加融合的細胞之一是用純化的人粒細胞免疫接種得到的。

可從抗-1D3單克隆抗體在免疫測定應用中看出這種特異性抗體的優點。這種單克隆抗體可執行各種不同的功能，其功能取決于如何使用它，即如何進行標記，如用熒光素或生物素標記，或如何結合到小珠或微球上，用于鑒定和計數的中性白細胞珠粒或微球可以是磁性的或非磁性的。

本發明的目的在于提供一種用雜交癌技術生產的細胞系，該細胞系具有寄存在美國典型培養物保藏中心（馬利蘭州，Rockville）的樣品（登記號為A、T、C、C、HB9445）的主要特征，即可產生抗中性白細胞上1D3表面抗原的抗體。

本發明的單克隆抗體被命名為1D3。它是使用由Kohler和Milstein介紹的標準技術〔Nature，256，495-497（1975）〕通過經用純化的人粒細胞免疫的鼠脾細胞與鼠骨髓瘤細胞融合而產生的。

用于免疫接種程序的人粒細胞是以特定方法制備的。經靜脈穿刺得到人血，通過Ficoll-Hypaque密度梯度沉淀使單核細胞與粒細胞和紅血細胞分離（1.077g/cc）。然后用Hanks平衡鹽溶液稀釋紅細胞/粒細胞片狀沉淀物并加入1/10體積的4%高分子量葡聚糖使紅血細胞和粒細胞分離。將粒細胞懸浮于磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中。

將10⁶個這一高度純化的人粒細胞注射到經麻醉的BalbC小鼠的脾臟中。脾內免疫接種后十天，用10×10⁶個同樣純化的粒細胞經尾靜脈注射對小鼠作加強免疫。三天后，回收鼠脾并用常規技術收集脾細胞。