[其他]微量免疫測定用的微型固相物

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 87207371
• 申請日: 1987-08-01
• 公開（公告）號: CN87207371U
• 公開（公告）日: 1988-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 阮克和
• 申請（專利權(quán)）人: 福建醫(yī)學院
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本實用新型屬于免疫測定技術(shù)領(lǐng)域。

目前商品化的免疫測定固相物，大多使用聚苯乙烯板和聚苯乙烯球。由于球狀固相物比板狀固相物在一定量的溶液中，可利用的表面積大，因此球狀固相物的測定靈敏度較高。聚苯乙烯球的特點是非特異性吸附小，測定靈敏度高。但有如下幾點不足之處：1、價格較貴，用其做固相物，試劑盒造價較高。2、材料較硬，直徑小于3毫米的聚苯乙烯球不容易生產(chǎn)。目前大量使用的聚苯乙烯球直徑為3.2毫米，而3.2毫米直徑的球在試管中一般需要50μl以上體積的溶液才能淹蓋球面，因此當反應(yīng)體系較小時，這種固相物就不適用。3、聚苯乙烯球在測定中，從一個試管移至另一個試管，需用鑷子夾，操作不方便。

本實用新型的任務(wù)是制作一種廉價的、操作簡便，且能適于較小反應(yīng)體系的免疫測定微型固相物。

本實用新型是用軟塑料如聚氯乙烯為固相物材料的。由于聚氯乙烯的非特異性吸附大，影響免疫測定的靈敏度，因此很難以聚氯乙烯為固相物材料。本實用新型是將聚氯乙烯固相物做得很小（直徑小于2.0mm），減小其非特異性吸附，使得固相物既能適應(yīng)小于50μl的反應(yīng)體系，又能提高靈敏度。另外，為克服固相物體積太小操作不方便的缺陷，在固相物上連有一操作柄。

本實用新型用市面上出售的實心軟塑料絲，按需要切成一定長度的顆粒作固相物，這樣使得固相物的材料成本非常低廉，且制作非常簡單。一般固相物的體積制成小于4mm³、大于0.1mm³的任意一種規(guī)格，使固相物既有高的靈敏度，又便于安裝操作柄。

將軟塑料絲切成的固相物顆粒用曲拉通（Triton）、重蒸水洗滌后，置超聲波洗滌器中振蕩，這樣反復多次，最后用衛(wèi)生紙吸干，再放入一定量的抗體或抗原溶液中，在室溫或4℃下放置1－24小時，用含有牛血清白蛋白的緩沖液將固相物洗三遍，再用非特異性吸附小的金屬或其他非塑料的堅硬材料作操作柄，連在固相物上，形成一個帶柄的固相物。在使用中，至最后一步時，可將柄去掉，以減小非特異性吸附的干擾，提高測定靈敏度。

本實用新型的優(yōu)點是價格極為低廉、制作非常簡單，由于固相物體積很小，反應(yīng)體系也很小，從而節(jié)約了試劑。且操作方便，靈敏度高，能廣泛應(yīng)用于多種免疫測定。

本應(yīng)用新型的實施例：

以市面上出售的直徑為0.8mm的聚氯乙烯塑料絲為材料，切成每粒長0.8－1.0mm的園柱體，然后用0.01％的曲拉通（Triton）、重蒸水洗滌，再置于超聲波洗滌器中振蕩，這樣反復5次，用衛(wèi)生紙吸干。

將洗凈、吸干的聚氯乙烯固相物顆粒放在0.1mg／ml的抗體溶液（溶于PH7.5、含0.1％NaN₃的0.1M磷酸鹽緩沖液）中，在4℃溫度中，放置12小時，然后將抗體溶液吸去，用0.01M磷酸緩沖液（含0.1％牛血清白蛋白和0.1％NaN₃）將固相物洗三遍。將固相物浸在該緩沖液中，在4℃下，至少可保存一年。

臨用前，將被抗體包被的微型固相物從緩沖液中取出，用衛(wèi)生紙吸干，在切面處插入一個大頭針（2.6cm長）作操作柄。將固相物放入長2.0厘米、內(nèi)徑2－3.5毫米的，底部呈V或U型的小試管中，就可與抗原反應(yīng)，進行免疫測定。

如附圖：1是操作柄大頭針；

2是小試管；

3是抗體包被的固相物；

4是抗原溶液。

微型固相物用于快速β－h(huán)CG（人絨毛膜促性腺激素）酶標定性檢測例：

將抗β－h(huán)CG的IgG包被的帶柄的固相物（固相物體積同實施例）與10μl????hCG標準液、尿或末梢血清在第1號小試管中反應(yīng)5分鐘，提起固相物，移入2號小試管（含10μl5－15μg／ml抗β－h(huán)CGFab′－辣根過氧化酶交聯(lián)物）反應(yīng)5分鐘，提起固相物至水龍頭沖洗，再將固相物放入盛有20μl底物溶液的3號試管中，在試管口將大頭針拉掉，反應(yīng)2－5分鐘后，肉眼觀察，無色管為hCG陰性；蘭色管為hCG陽性。這種方法hCG的最小測定值為0.1單位／ml，妊娠7－10天能被迅速檢出。

微型固相物用于高靈敏度β－h(huán)CG酶免疫測定：

將抗β－h(huán)CG的IgG包被的帶柄的微型固相物與10μl????hCG標準液或待測末梢血清或尿在1號試管中30℃反應(yīng)2小時，用0.01M磷酸緩沖液（含0.15M????NaCl、PH7.0）洗二遍后，移入2號試管（盛有10μl????0.1－1.0μg／ml抗β－h(huán)CG????Fab′－辣根過氧化酶交聯(lián)物）繼續(xù)在30℃反應(yīng)2小時，再用上述0.01M磷酸緩沖液洗二遍后轉(zhuǎn)入含有20μl底物的3號試管中，同時去掉操作柄，繼續(xù)在30℃反應(yīng)1小時，再在3號試管中加20μl????4N硫酸中止反應(yīng)溶液移入微量比色池中，用波長450nm檢測（用泰州東方儀器廠的多功能紫外可見光分光光度計）。hCG的最小測定值為10Pg／管（1.0ng／ml）。