[其他]抗前S抗體檢測法

無效

• 申請號: 88102419
• 申請日: 1988-04-23
• 公開（公告）號: CN88102419A
• 公開（公告）日: 1988-11-09
• 發明（設計）人: 藤澤幸夫;西村紀;伊藤康明
• 申請（專利權）人: 武田藥品工業株式會社
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 楊九昌

本發明涉及檢測人血清中抗前S抗體的方法，更具體地說，本發明涉及使用生物素-抗生物素蛋白系統、以酶免疫檢測法檢測針對乙型肝炎病毒（HBV）env蛋白中L蛋白或M蛋白的N末端前S區的抗體的方法。

已經知道，在患有因感染HBV引起的急性肝炎并表現有相應癥狀的病人血清中，在誘導HBs抗原-抗HBs抗體系統、HBc抗原-抗HBc抗體系統及HBe抗原-抗HBe抗體系統之前，就已誘導了前S抗原-抗前S抗體系統（A·Robert????Neurath，et????al.，Nature，315，154（1985）〕。已引起關注的問題有，前S抗原和抗前S抗體在完成HBV感染中所起的作用、引起乙型肝炎癥狀的機制、以及乙型肝炎的預防等。特別是，目前已通過在黑猩猩身上進行的實驗證實，抗前S區中前S2肽的抗血清可中和HBV（A·Robert????Neurath????et????al，Vaccine，4，35（1986）〕，而且可用前S2肽疫苗預防由HBV引起的急性肝炎癥狀的產生〔Y·Itothet????al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，83，9174（1986）〕。另外有報道指出，抗前S區中前S1肽的抗體可阻止HBV與肝癌細胞的結合〔A·Robert????Neurathetal.，Cell，46，429（1986）〕。鑒于已認識到了抗S抗體的重要性，所以期望建立一個能特異而靈敏地檢測乙型肝炎病人或接種乙型肝炎疫苗者的血清內抗前S抗體的系統。

當使用通常的酶免疫檢測法（EIA）檢測人血清中的抗體時，常常出現明顯的非特異性反應，與用實驗動物血清檢測時的情況有很大差異。所以必須使用高度稀釋的血清。因此，酶免疫檢測法所具有的高度敏感性的優點常常得不到充分利用。這樣一來，當所測定的人血清中的抗體效價很低時，則使用放射免疫測定法，其中使用了一種抗原和一種用放射性物質標記的抗體。事實上亦可使用放射免疫測定法來檢測人的抗前S抗體。例如，已用抗球蛋白方法，通過檢測與固相中前S肽結合的抗體來測定急性乙型肝炎病人血清中的抗前S抗體〔A·Robert Neurathet al.，Nature，315，154（1985）〕。已使用抑制法，以人血清與含有一定量前S抗原的HBs抗原溶液反應，然后使含未反應的前S抗原的HBs抗原結合到用抗前S抗體包被的小球上，并用¹²⁵I標記的抗HBs抗體檢測之，從而檢測人血清中的抗前S抗體〔A·Budkowska etal.，Hepatology，6，360（1986）〕。另外，就人的抗前S2區中聚合的清蛋白受體（PAR）的抗體來說，已用抑制方法檢測了抗PAR抗體，其中包括使血清與固相中含PAR的HBs顆粒反應，然后使聚合的人血清清蛋白（聚HSA）結合到未反應的PAR上并用¹²⁵I標記的單克隆抗聚HSA抗體檢測之〔H·Ok-amoto et al.，Hepatology，6，354（1986）〕。

可見，放射免疫測定法是一種靈敏地檢測人血清中抗前S抗體的僅有的已知方法。然而，從安全性和實用性角度來看，使用放射性物質檢測抗體效價受到許多限制。因此，急待發展一種使用非放射性物質的、高度靈敏的檢測系統。

基于這一背景，本發明人著手建立一個不使用放射性物質，而又能高度靈敏且簡便地檢測人血清中抗前S抗體的系統。

已提出的不使用放射性物質檢測抗體效價的高度靈敏的檢測法，有酶免疫測定法（EIA）和酶聯免疫吸附測定法（ELISA）。但是用常規的EIA或ELISA法檢測人血清中的抗前S抗體時，觀察到非特異性反應。為防止出現非特異反應，必須使用稀釋到100至400倍的血清。相反地，本發明人發現，當使用生物素-抗生物素蛋白系統（BAS）以EIA和ELISA法檢測人血清中的抗體時，便可抑制非特異性反應，并能夠很靈敏地檢測抗前S抗體，從而完成了本發明。