技術領域

本發明涉及天然藥物化學，具體涉及從紅牛膝中分離純化皂苷類成分的方法。

背景技術

紅牛膝，為四川涼山彝族自治州、云南楚雄彝族自治州、貴州等彝族地區的彝醫臨床常用藥材，在涼山彝族自治州，稱為勒死補你或乃死補你為莧科植物頭花杯莧Cyathula Capitata(Wall.)Moq.的根，用于治療跌打損傷、風濕、類風濕等疾病。

國內外對牛膝類藥材的研究主要集中在中醫臨床上常用的牛膝Achyranthes bidentata Blume與川牛膝Cyathula officinalis Kuan；紅牛膝的相關研究較少。紅牛膝作為四川涼山彝族自治州、云南楚雄彝族自治州、貴川等彝族地區的彝醫臨床常用藥材，目前對紅牛膝成分的研究報道較少。

發明內容

本發明提供了從紅牛膝中分離純化皂苷類成分的方法，所述皂苷類成分如下之一所示：

化合物Ⅲ：R₁＝H，化合物Ⅳ：化合物Ⅴ：

該方法包括如下操作：

(1)取紅牛膝，以含水或不含水的醇類溶劑提取，提取液濃縮至無醇味，以正丁醇萃取，取正丁醇部位上硅膠柱，依次用如下配比的三氯甲烷:甲醇:水下相梯度洗脫：15:1:0.2、10:1:0.2、8:1:0.2、6:1:0.2、3:1:0.2、2:1:0.2，薄層追蹤，合并相同組分，并對合并的相同組份按順序編號；

(2)分別取第3、4或5組份，上硅膠柱，依次用如下配比的三氯甲烷:甲醇:水下相梯度洗脫：(6～4):1:0.2、3:1:0.2、2:1:0.2，薄層追蹤，合并相同組分，上葡聚糖凝膠柱，甲醇：水(30～50):(70～50)洗脫，分別得化合物Ⅲ、IV或V。

進一步地，步驟(2)中，取洗脫得到的第3組份上硅膠柱，依次用如下配比的三氯甲烷:甲醇:水下相梯度洗脫：6:1:0.2、3:1:0.2、2:1:0.2，薄層追蹤，合并相同組分，上葡聚糖凝膠柱，甲醇：水50:50洗脫，得化合物Ⅲ。

進一步地，步驟(2)中，取洗脫得到的第4組份上硅膠柱，依次用如下配比的三氯甲烷:甲醇:水下相梯度洗脫：6:1:0.2、3:1:0.2、2:1:0.2，薄層追蹤，合并相同組分，上葡聚糖凝膠柱，甲醇：水50:50洗脫，得化合物Ⅳ。

進一步地，步驟(2)中，取洗脫得到的第5組份上硅膠柱，依次用如下配比的三氯甲烷:甲醇:水下相梯度洗脫：4:1:0.2、3:1:0.2、2:1:0.2，薄層追蹤，合并相同組分，上葡聚糖凝膠柱，甲醇：水30:70洗脫，得化合物。

其中，所述醇類溶劑選自甲醇或乙醇；所述含水醇類溶劑中醇類溶劑的濃度為60～85％v/v。

本發明一個具體實施方式中，所述含水醇類溶劑中醇類溶劑的濃度為70～80％v/v。

其中，采用薄層追蹤時，以硫酸乙醇溶液為顯色劑。

本發明中，正丁醇萃取前，可以參照系統溶劑法進行逐級萃取，如本發明一個具體實施方式中，依次使用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯進行萃取。

上述方法可以從紅牛膝中分離得到齊墩果酸皂苷類成分，可以保證較高的純度，為紅牛膝的深入研究鑒定了一定的物質基礎。

發明人在對紅牛膝的化學成分進行分離純化過程中，發現了多種齊墩果酸類皂苷成分，其中就包括3-O-[α-L-吡喃鼠李糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸]-齊墩果酸、3-O-(β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-齊墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、3-O-[α-L-吡喃鼠李糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸]-齊墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。經藥理研究及臨床驗證表明，齊墩果酸皂苷類成分具有保肝護肝、調節免疫、抗炎、抑菌、抗病毒、延緩衰老、防治心血管疾病等作用^[1-4]，在藥品及保健品的開發中具有廣闊的應用前景。

另外，目前還沒有見使用具體化學成分對紅牛膝的質量進行控制的報道，本發明分離的齊墩果酸類皂苷在一定程度上與紅牛膝的藥效相關，或可以作為對紅牛膝質量檢測的物質基礎。

其中，經過UPLC檢測發現，3-O-[α-L-吡喃鼠李糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸]-齊墩果酸-28-O-(β-D-吡喃葡萄糖)在各批次藥材中的含量波動較小。以此成分來作為檢測紅牛膝的指標成分，不僅可以從一定程度上反應藥效，還可以使得檢測結果更加穩定，重現性好。