[其他]逆向斑點分子雜交技術無效
| 申請號： | 85109606 | 申請日： | 1985-12-05 |
| 公開（公告）號： | CN85109606A | 公開（公告）日： | 1987-06-17 |
| 發明（設計）人： | 陳淵卿;顧健人 | 申請（專利權）人： | 上海市腫瘤研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12N15/00;G01N33/576 |
| 代理公司： | 上海專利事務所 | 代理人： | 吳淑芬 |
| 地址： | 上海市東安*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一種逆向斑點分子雜交技術，它適用于人體乙肝病毒的檢測。本發明通過HBV內源聚合酶的作用，以標記dNTP參入血清，得到標記HBVDHA，作為分子探針，與標準的HBVDHA作逆向斑點分子雜交，從而既測定了乙肝病毒HBVDHA聚合酶的活力，又顯示了HBVDHA的存在。它克服了單獨測定HBVDHA、HBVDHA，聚合酶或血清免疫標志的缺點，成為確定HBV感染的直接而可靠的依據。 | ||
| 搜索關鍵詞： | 逆向 斑點 分子 雜交 技術 | ||
【主權項】：
1、一種逆向斑點分子雜交的檢測方法，包括以下步驟對含有完整HBVDHA順序的重組質粒作變性處理；將所述經變性處理的重組質粒放入冰溶中速冷；在所述速冷后的重組質粒內加入氫氧化鈉使后者的濃度為0.2-0.50克分子；將所述的氫氧化鈉溶液點樣于硝基纖維濾膜，并使之干燥；將所述點樣后的濾膜用緩沖系統浸泡中和，并使之干燥；將所述干燥后的濾膜放入預雜交液中進行預雜交；將受撿血清加入非離子去垢劑及聚合酶保護劑；將所述血清再加入包含緩沖系統及四種DHA合成的前生物三磷酸脫氧核苷、其中至少有一種帶有可顯示的標記物的反應混合液、進行培育、制成含標記物的HBVDHA分子探針；將所述含標記物的HBVDHA分子探針加入雜交混合液，作變性處理，制成單鏈的含標記物的HBVDHA分子探針；將所述的單鏈含標記物的HBVDHA分子探針放入冰浴中速冷；將所述速冷后的單鏈的含標記物的分子探針與上述經預雜交液雜交處理的硝基纖維雜交濾膜雜交，并用洗脫液洗去未雜交的游離的標記物；將所述雜交后的硝基纖維雜交濾膜干燥后，通過標記物顯示的方法來判定受撿血清中感染性的HBV的存在。
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