[發(fā)明專利]一種制備阿卡波糖的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210053220.1
• 申請日: 2012-03-02
• 公開（公告）號: CN102559814A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李小兵;魏青;時偉;陸敏;姚清國
• 申請（專利權(quán)）人: 石家莊學院
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12R1/045
• 代理公司: 石家莊新世紀專利商標事務(wù)所有限公司 13100
• 代理人: 張素靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種制備阿卡波糖的方法。

技術(shù)背景

阿卡波糖是有效的葡糖苷酶抑制劑，用作口服治療糖尿病的抗糖尿病藥物，通過游動放線菌（Actinoplanes?utahensis）的發(fā)酵培養(yǎng)獲得。阿卡波糖的分子結(jié)構(gòu)如下式，由4個單糖組成，其生物合成主要是糖代謝，發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源（糖源）組成十分關(guān)鍵。阿卡波糖發(fā)酵的最大特點是，生產(chǎn)菌的生產(chǎn)力顯著依賴于培養(yǎng)液的滲透壓濃度（制備阿卡波糖的滲透控制的發(fā)酵方法，專利公?開?號：CN1178837，拜爾公司），滲透壓的控制主要通過維持培養(yǎng)液中高濃度底物來實現(xiàn)，糖源就是其中最需要控制的。糖源的質(zhì)量是發(fā)酵水平高低和雜質(zhì)控制的關(guān)鍵，培養(yǎng)液中的糖源主要是復(fù)合型麥芽糖和葡萄糖，相對而言，復(fù)合型麥芽糖要求維持高濃度，而葡萄糖控制在較低水平。

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對于工業(yè)生產(chǎn)，成本是優(yōu)先考慮的，麥芽糖是阿卡波糖發(fā)酵培養(yǎng)基組成中最多的一種營養(yǎng)成份，直接購買飴糖、高麥芽糖漿，成本比較高。同時，我們也做過考查，購買的飴糖、高麥芽糖漿，直接用于游動放線菌的發(fā)酵培養(yǎng)，產(chǎn)物阿卡波糖的濃度并不高，尤其是純麥芽糖的效果更差。阿卡波糖發(fā)酵需要復(fù)合型的麥芽糖，以麥芽二糖、麥芽三糖為主，輔以少量麥芽四糖和葡萄糖，復(fù)合麥芽糖含量越高，發(fā)酵水平相對越高，發(fā)酵液中的雜質(zhì)，尤其是關(guān)鍵雜質(zhì)A的含量也易于控制在較低水平（雜質(zhì)A目前沒有好的提取方法去除，主要通過發(fā)酵控制）。復(fù)合麥芽糖需采用淀粉液化糖化制備，液化糖化工藝不同，得到的復(fù)合麥芽糖含量差異非常大，直接關(guān)系到阿卡波糖的發(fā)酵水平和雜質(zhì)含量。本發(fā)明將淀粉經(jīng)過多種酶液化、糖化，得到高含量復(fù)合麥芽糖，不需其它處理，滅菌后直接用于阿卡波糖發(fā)酵生產(chǎn)，是最有效、最經(jīng)濟的生產(chǎn)方式。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對上述現(xiàn)狀，提供一種經(jīng)濟有效且產(chǎn)物純度較高的制備阿卡波糖的方法。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案：

一種制備阿卡波糖的方法，其具體步驟為：

（1）淀粉液化：將淀粉加水攪拌溶解，配制成20-40%（w/v）的乳液，調(diào)pH到5.5-6.2，加入淀粉質(zhì)量0.05-0.2%的耐高溫a-淀粉酶和0.02-0.08%無水氯化鈣，加熱到105-110℃，維持5-10分鐘，DE值達到10-18時，降溫至60℃得液化液；

（2）糖化：將步驟（1）獲得的液化液，加入所述淀粉質(zhì)量0.05-0.2%的普魯蘭酶、0.05-0.2%的真菌酶、0.25-0.45%的β-淀粉酶，55-60℃維持4－8小時，得糖化液；

（3）滅菌后發(fā)酵：步驟（2）獲得的淀粉糖化液，直接加入其他營養(yǎng)物質(zhì)制成阿卡波糖發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌后接入阿卡波糖生產(chǎn)菌種游動放線菌進行發(fā)酵，發(fā)酵過程中控制發(fā)酵培養(yǎng)液中總糖含量為6.0-12.0%（w/w），葡萄糖含量不超過2.8%（w/w），發(fā)酵培養(yǎng)5-6天，發(fā)酵液經(jīng)提取制得阿卡波糖。

所述淀粉的含糖量為70-85%（w/w）。

本發(fā)明采用上述技術(shù)方案取得的有益效果是：

采用本發(fā)明的方法通過多種酶對淀粉（含糖量在70-85%）進行液化、糖化，淀粉轉(zhuǎn)化為復(fù)合麥芽糖的轉(zhuǎn)化率可達85-95%，用于阿卡波糖發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵水平高；關(guān)鍵雜質(zhì)A含量低，減少了下游的提取純化壓力；淀粉代替其它糖源，生產(chǎn)成本更低。

本發(fā)明公開的制備阿卡波糖的方法，是一種適合阿卡波糖發(fā)酵的高產(chǎn)量、低雜質(zhì)、低成本的生產(chǎn)技術(shù)。

具體實施方式

????下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。

部分試驗在麗珠集團新北江制藥股份有限公司完成。

實施例1