[發(fā)明專利]提取分離海州香薷中迷迭香酸、芹菜素和木犀草素的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310042896.5
• 申請日: 2013-01-31
• 公開（公告）號: CN103130644A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭紅云;邢嚴(yán);張良;章國林;申有青;王會平;曾衛(wèi)衛(wèi)
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C07C69/732
• 分類號: C07C69/732;C07C67/48;C07C67/56;C07D311/30;C07D311/40
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

1.提取分離海州香薷中迷迭香酸、芹菜素和木犀草素的方法，其特征在于依次包括以下步驟：

（1）、乙醇浸提：將盛花期收獲的海州香薷花枝和葉片風(fēng)干后粉碎，用體積濃度≥95%的乙醇溶液浸提，所得的提取液經(jīng)真空濃縮后得粗浸膏；將粗浸膏用水溶解，得溶解液；在溶解液中加入石油醚萃取，所述石油醚與溶解液的體積比為1:0.9~1.1，棄石油醚層；在所得的水層中加入乙酸乙酯反復(fù)萃取，直至乙酸乙酯萃取層無顏色；所述每次萃取時(shí)乙酸乙酯的用量是溶解液體積的0.9~1.1倍；將所有的乙酸乙酯萃取層合并后濃縮，得棕黑色浸膏；

（2）、大孔樹脂粗分離：將所得的棕黑色浸膏制成水溶液，上樣于D101大孔樹脂并充分吸附，依次用水以及體積濃度為10%、20%、30%、40%的乙醇溶液以1.4~1.6BV/h梯度進(jìn)行洗脫分離；收集體積濃度為30%和40%乙醇溶液對應(yīng)的洗脫液，濃縮得到黃棕色浸膏；

所述棕黑色浸膏與D101大孔樹脂的用量比為：1g棕黑色浸膏/10~15mlD101大孔樹脂；

所述每100ml水溶液中含有15~25g的棕黑色浸膏；

所述水、體積濃度分別為10%、20%、30%、40%的乙醇溶液的用量分別為：0.8~1.2BV、1.8~2.2BV、4.8~5.2BV、5.8~6.2BV、3.8~4.2BV；

（3）、聚酰胺柱分離：將所得的黃棕色浸膏用甲醇溶解，得溶液，所述黃棕色浸膏與甲醇的用量比為1g/2~5ml；按黃棕色浸膏與聚酰胺粉為1:1~2的質(zhì)量比，在所述溶液中加入聚酰胺粉，得到的懸濁液在20~30℃下減壓濃縮至干，得粉狀上樣物；

按黃棕色浸膏與聚酰胺的質(zhì)量比1:30~50的比例，取依次經(jīng)乙醇和水處理后的聚酰胺溶液倒入層析柱中，并用二氯甲烷置換聚酰胺溶液中的水；

將粉狀上樣物均勻上樣于聚酰胺柱頂端，以CH₂Cl₂:CH₃OH:HCOOH=(60:1:3)，(50:1:2.5)，(40:1:2)，(30:1:1.5)，(20:1:1)的體積比濃度梯度進(jìn)行加壓梯度洗脫，用TLC分析，以CH₂Cl₂:CH₃OH:HCOOH=20:2:1為展開劑，通過質(zhì)量濃度3%的FeCl₃乙醇溶液顯色指示，根據(jù)顯色斑點(diǎn)分布情況，收集成份相似的洗脫液；分別減壓濃縮，25~50℃逐漸升溫旋蒸至干，從而分別得到浸膏A、浸膏B、浸膏C；其中，

浸膏A對應(yīng)濃度梯度為CH₂Cl₂:CH₃OH:HCOOH=60:1:3；

浸膏B對應(yīng)濃度梯度為CH₂Cl₂:CH₃OH:HCOOH=?50:1:2.5以及CH₂Cl₂:CH₃OH:HCOOH=40:1:2；

浸膏C對應(yīng)濃度梯度為CH₂Cl₂:CH₃OH:HCOOH=?30:1:1.5?CH₂Cl₂:CH₃OH:HCOOH=?20:1:1；

（4）、硅膠柱層析純化精制：

①、將硅膠用乙酸乙酯或石油醚溶解后加壓裝柱，硅膠與乙酸乙酯或石油醚的質(zhì)量體積比為1g/4~8ml；所述配套浸膏A的硅膠用乙酸乙酯溶解，配套浸膏B和配套浸膏C的硅膠均用石油醚溶解；

②、將上述所得的浸膏A、浸膏B和浸膏C，分別進(jìn)行以下操作：用甲醇溶解后加入硅膠進(jìn)行拌樣，硅膠與浸膏A、浸膏B和浸膏C的重量比均為2:1~4:1；旋干后將所得的3種拌樣分別裝在柱頂端，上樣后分別進(jìn)行硅膠柱層析純化精制；從而分別對應(yīng)的得到芹菜素、木犀草素和迷迭香酸；

所述步驟①所用的硅膠的總重量與步驟②拌樣用硅膠的重量比為20~30:1。?