[發明專利]β?人絨毛膜促性腺激素測定試劑盒及制作方法

在審

• 申請號: 201611161198.7
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN106596980A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 王有志;王文亮;劉衍亮;陳萍萍;宋璐琳;李紅江
• 申請（專利權）人: 威海紐普生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76;G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 威海科星專利事務所37202
• 代理人: 初姣姣

技術領域：

本發明涉及醫學免疫學中熒光免疫層析技術領域，包括蛋白交聯技術、膜層析技術、標記免疫分析技術等。具體地說是一種能夠快速準確的對血清、血漿和全血等樣品中β-人絨毛膜促性腺激素進行定量分析的β-人絨毛膜促性腺激素測定試劑盒及制作方法。

背景技術：

人絨毛膜促性腺激素(Human Chorionic Gonadotropin，HCG)是由胎盤滋養層細胞所分泌的一類糖蛋白類激素，由α、β兩個亞基組成，含糖量為30％左右。α-亞基由92個氨基酸殘基組成，分子量14.5KD，它與FSH、LH及TSH的α-亞基結構相似；β-亞基為特異性鏈，由145個氨基酸組成，分子量22KD。女性受精的卵子移動到子宮腔內著床后，形成胚胎，在發育成為胎兒的過程中，孕婦胎盤絨毛膜滋養層合體細胞合成，產生大量的hCG進入母體并通過孕婦的血液循環而排泄到尿中。當妊娠1-2周時血液和尿中的hCG水平即可迅速升高，第8-12周可達到高峰。直至孕期3個月降至中等水平，并一直維持到妊娠末期。檢測β-hCG的重要意義可以了解胎兒發育的狀況以及是否存有與妊娠相關的多種疾病，如流產、保胎成功與否、宮外孕、滋養層細胞腫瘤、葡萄胎等多種疾病的輔助診斷。

正常發育的絨毛所分泌的HCG量很大，每天的滴度不斷快速上升，每48小時上升66％以上。既如果β-HCG每兩天增加的量大于66％，可以診斷為宮內妊娠；而如果增加的量小于66％，則宮外孕或宮內孕發育不良的可能性很大，對于宮外孕，由于輸卵管肌層菲薄，血供不良，HCG分泌量很低，每天升值較小，48小時上升不到50％(但有一部分人最初的HCG上升正常)。如果用HCG難以確認，還可用血孕酮來做輔助性診斷，進一步還可以進行B超檢查。如果HCG增加速度非常快，表明有葡萄胎的可能，必須緊密監測。當然也有可能是雙胞胎。另外：HCG升高還有下列幾種可能：正常懷孕雙胞胎、葡萄胎或某些疾病或腫瘤。如在內分泌疾病中，如腦垂體疾病、甲狀腺功能亢進、婦科疾病如卵巢囊腫、子宮癌等HCG也可增高。近年來發現惡性腫瘤如默契胎瘤、胰腺瘤、胃癌、肝癌、乳腺癌、肺癌等血中HCG也可升高。因此在腫瘤科，將HCG看作是癌標志物之一。但必須結合臨床情況及其它檢查結果，通過綜合分析才能正確分析。產后9天或人工流產術后25天，血清HCG應恢復正常。如不符合這一情況，則應考慮有異常可能。建議流產手術后進行2次HCG定量檢查，有下降趨勢至＜25mIU/mL可判斷流產成功。

β-hCG水平的增長變化，不像人體其他激素那樣的變化幅度很小，胚胎發育正常時，不同周數均有一定的正常范圍；其次正常妊娠時β-hCG的增長速率是極快的，β-hCG的濃度每時每刻都在增加。因此可以通過對β-hCG的檢測和增長速率的觀察來輔助區分正常妊娠和許多異常的病理情況。

免疫分析技術是利用微量抗原與相應的高特異性抗體之間的免疫反應，來檢測如激素、藥物、蛋白質、多肽、酶、腫瘤相關抗原、微生素、病毒、細菌及金屬元素等生物體內活性物質。免疫分析技術包括標記免疫分析、非標記免疫分析和儀器免疫分析。

熒光免疫分析(FIA)和放射免疫分析(RIA)自問世以來，經歷了幾十年的發展，但是人們越來越感覺到FIA因自然本地太高，干擾檢測結果；RIA采用同位素標記，對人體有極大危害并給實驗帶來不便。酶免疫分析(EIA)也因酶本身不穩定，受其他影響因素較大，推廣應用受到限制。80年代初，人們開始研究用稀土元素代替熒光物質和同位素標記蛋白質或抗體，將時間分辨技術引入到生物檢測領域，建立了新型的超微量時間分辨熒光免疫分析技術(Time resolved Fluoroimmunoassay，簡稱TrFIA)。該技術采用多學科先進技術，集結了其他免疫分析的特點，在免疫學、分子生物學、細胞學和醫學等領域，取得長足的發展和廣泛應用。