[發明專利]一種用于海南島油茶資源鑒定的SNP標記及檢測方法在審
| 申請號： | 202210131329.6 | 申請日： | 2022-02-14 |
| 公開（公告）號： | CN114941037A | 公開（公告）日： | 2022-08-26 |
| 發明（設計）人： | 鄭道君;戚華沙;陳加利;孫秀秀;夏騰飛;王春梅;馬光耀 | 申請（專利權）人： | 海南省農業科學院三亞研究院（海南省實驗動物研究中心） |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京中安信知識產權代理事務所(普通合伙) 11248 | 代理人： | 趙黎虹 |
| 地址： | 572024 海南省三亞市崖*** | 國省代碼： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 海南島 油茶 資源 鑒定 snp 標記 檢測 方法 | ||
1.鑒定海南島油茶種質資源的葉綠體基因組SNP位點，其特征在于，所述SNP位點位于葉綠體基因組ycf1基因上，位于小果油茶葉綠體基因組的128161處位點，其堿基為C或T，所述小果油茶葉綠體基因組的入庫編號為Banklt2460817Camellia MZ189740。
2.用于海南島油茶種質資源鑒定的SNP特異性引物，其特征在于，所述特異性引物命名為ycf1-4，ycf1-4包括一個正向引物和一個反向引物；
正向引物的序列為：5'CGATCTTGATCCAGGCCTCA3'；
反向引物的序列為：5'ACAACACACATAAACATAAGGGCA3'。
3.海南島油茶種質資源的鑒定方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1、提取待測油茶種質材料總基因組DNA；
S2、以步驟S1提取的待測樣品DNA為擴增模板，以權利要求2中ycf1-4引物為擴增引物進行PCR擴增；
S3、對步驟S2的PCR產物進行測序，測序方法為Sanger一代常規測序。在擴增片段的第45個位點左右，種質堿基為“T”即為海南島內種質。
4.根據權利要求3所述的海南島油茶種質資源的鑒定方法，其特征在于：在步驟S2中采用PCR反應體系30μL：包括模板DNA 30ng，dNTPs 0.20mmol/L，序列0.13μmol/L，Taq DNA聚合酶3.00U，ddH2O補至總體積30μL；
反應擴增程序：94℃預變性5min；94℃變性1min，58℃退火1min，72℃延伸1.5min，進行40個循環；最后72℃延伸10min，4℃保存；
PCR擴增產物檢測：PCR擴增產物在含8％Goldview核酸染料的1.5％瓊脂糖凝膠上進行電泳，在0.5×TBE緩沖液中電壓100V電泳40min，跑膠結果在凝膠成像系統中拍照記錄，以100bp DNA為Marker，擴增產物僅1個條帶，且條帶大小為183bp左右，即為目標條帶。
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