[發明專利]一種用于海南島油茶資源鑒定的SNP標記及檢測方法

在審

• 申請號: 202210131329.6
• 申請日: 2022-02-14
• 公開（公告）號: CN114941037A
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 鄭道君;戚華沙;陳加利;孫秀秀;夏騰飛;王春梅;馬光耀
• 申請（專利權）人: 海南省農業科學院三亞研究院（海南省實驗動物研究中心）
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京中安信知識產權代理事務所(普通合伙) 11248
• 代理人: 趙黎虹

本發明涉及一種用于海南島油茶資源鑒定的SNP標記及檢測方法。本發明提供了一個用于海南島油茶種質資源特異性鑒定的SNP位點，以及檢測該標記的引物和方法。對該SNP的檢測，可實現海南島油茶種質資源的快速、準確鑒定。為科學保護海南島油茶種質資源，保障海南油茶特色產業發展，助力中國油茶產業有序發展提供技術支撐，對研究海南島特色油茶資源起源進化，以及海南油茶分子育種具有重要應用意義。

技術領域

本發明屬于分子生物學及植物分子育種技術領域領域，具體涉及一種用于海南島油茶資源鑒定的SNP標記及檢測方法。

背景技術

油茶主產和原產于中國，是中國重點發展的木本油料作物，與油菜籽、花生、大豆并稱中國4種主要大宗油料作物。它的茶籽油富含不飽和脂肪酸(可達90％左右，比油橄欖高)，是高級食用油，同時具有良好的保健藥用功效。油茶目前在中國的栽培面積約7000萬畝，主要分布在中國的南方地區。油茶在海南俗稱“山柚”，海南島是中國油茶資源分布的最南緣。由于海南島氣候獨特，海峽隔離，油茶又是異花授粉植物，在環境和遺傳控制的雙重作用下，海南島山柚資源表型變異極為豐富且獨特，茶油品質無苦味香稠度大，明顯區別于內地茶油。經鑒定，海南島油茶資源屬于山茶屬油茶組越南油茶的一個特殊類群。正是由于不同于內地的茶油品質，海南茶籽油在市場上的價格為內地的3-5倍。海南山柚作為海南省的一個極具特色的經濟作物，發展勢頭良好，2021年栽培面積15萬畝左右。

由于海南油茶產業良好的經濟效益，在種苗市場有大量非本地油茶種源的種苗涌入海南。實踐證明，這些種苗種源大部分適應海南島的生長環境，出現造林成率低、生長極慢、開花結實低等問題。同時，即使有個別的油茶種源能適應海南生境長生，所產的茶籽油也不具備本地茶籽油的品質。此外，由于海南茶籽油價格高，每年有大量的非本地茶籽進入海南充當本地茶籽用于榨油，摻合入本地茶籽油，影響本地茶籽油的品質。這些極不利海南油茶特色油茶的健康可持續發展。同時，近年也出現海南本地油茶種苗被引種到內地種植的現象。實踐證明，海南本地品種區域性較強，在內地的大部分地區不適宜種植。因此，如何鑒定海南島油茶資源，建立快速高效的技術或體系，顯得尤為急迫。

發明內容

為了克服現有技術中的至少部分缺陷，本發明提供了一種用于海南島油茶資源特異性鑒定的葉綠體SNP及檢測方法。對特異性SNP所在的葉綠體基因組片段設計引物，對特異性SNP進行檢測，高效區分鑒定海南島油茶種質資源。

本發明的第一個目的是提供鑒定海南島油茶種質資源的基因組SNP位點。

本發明的第二個目的是提供用于海南島油茶種質資源鑒定的SNP特異性引物。

本發明的第三個目的是提供一種海南島油茶種質資源的鑒定方法。

為了實現上述目的，本發明是通過以下方案予以實現的：

S1、提取待測香花油茶(Camellia osmantha)、小果油茶(C.oleiferavar.monosperma)、普通油茶(C.oleifera)，以及越南油茶(C.vietnamensis)在海南島及海南島外分布種質資源的總基因組DNA；

S2、以步驟S1提取的待測樣品DNA為擴增模板，以權利要求2中ycf1-4引物為擴增引物進行PCR擴增；PCR反應體系30μL：包括模板DNA 30ng，dNTPs 0.20mmol/L，序列0.13μmol/L，Taq DNA聚合酶3.00U，ddH2O補至總體積30μL。

反應擴增程序：94℃預變性5min；94℃變性1min，58℃退火1min，72℃延伸1.5min，進行40個循環；最后72℃延伸10min，4℃保存；

PCR擴增產物檢測：PCR擴增產物在含8％Goldview核酸染料的1.5％瓊脂糖凝膠上進行電泳，在0.5×TBE緩沖液中電壓100V電泳40min，跑膠結果在凝膠成像系統中拍照記錄，以100bp DNA為Marker，擴增產物僅1個條帶，且條帶大小為183bp左右，即為目標條帶。