[其他]用嗜熱放線菌生產(chǎn)固定化葡萄糖異構(gòu)酶的方法及其用于高果糖糖漿的生產(chǎn)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 85100412
• 申請日: 1985-06-25
• 公開（公告）號(hào): CN85100412B
• 公開（公告）日: 1988-02-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賀家明;袁建國
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省食品發(fā)酵工業(yè)研究所
• 主分類號(hào): C12N9/92
• 分類號(hào): C12N9/92;C12P19/02;//
• 代理公司: 山東省專利服務(wù)處
• 代理人: 徐槐

本發(fā)明是關(guān)于葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法，特別是關(guān)于固定化葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法及其用于生產(chǎn)高果糖糖漿（即果萄糖漿）的方法。

目前國際工業(yè)上使用的嗜熱放線菌基本是生產(chǎn)胞內(nèi)葡萄糖異構(gòu)酶類型。例如《特許公報(bào)》昭49-42555及昭50-17560介紹了一種用嗜熱放線菌（嗜熱鏈霉菌）Streptomyces，YT-NO，6生產(chǎn)固定化葡萄糖異構(gòu)酶的方法，是先將從發(fā)酵液中分離、收集到的菌體進(jìn)行自溶處理，得到酶液，再使酶掛到載體上進(jìn)行異構(gòu)化。該方法由于產(chǎn)生的酶多是胞內(nèi)酶，因此需要一套破壞細(xì)胞壁釋出酶的工藝及設(shè)備，所以上述方法存在工藝較復(fù)雜、設(shè)備較多的問題。

本發(fā)明的目的是采用胞外酶型嗜熱放線菌（嗜熱鏈霉菌）StreptomycesM1033（其寄存在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，寄存號(hào)為CGMCCN00032）生產(chǎn)葡萄糖異構(gòu)酶，此酶中胞外酶占總酶量的80%以上，培養(yǎng)液容易過濾，酶蛋白較純（清發(fā)酵液經(jīng)（NH₄）₂SO₄淀沉，透析脫鹽，DEAE-SephadexA₃₀柱和SephadexG₁₅₀柱提純，得均一態(tài)葡萄糖異構(gòu)酶，園盤電泳為一個(gè)區(qū)帶）。因此可以直接用濾清的發(fā)酵液作酶源，將酶吸附在大孔陰離子交換樹脂載體上，制成固定化葡萄糖異構(gòu)酶，不用再進(jìn)行胞內(nèi)酶釋出處理工序，因此簡化了工藝，減少了設(shè)備。

首先本發(fā)明提供了產(chǎn)生胞外葡萄糖異構(gòu)酶的嗜熱放線菌（嗜熱鏈霉菌）菌株StreptomycesM1033。該菌株是發(fā)明人在1978年從2847份土樣中分離純化得到的原始菌株，再經(jīng)紫外線誘變，紫外線與亞硝基胍復(fù)合誘變，以及不斷純化所得。經(jīng)生產(chǎn)實(shí)踐，國內(nèi)有關(guān)專家鑒定為產(chǎn)胞外葡萄糖異構(gòu)酶型國產(chǎn)優(yōu)良菌株。

由于本發(fā)明的菌株在葡萄糖天冬素瓊脂上不形成可溶性色素;通氣培養(yǎng)溫度為40-45℃;胞外酶占80%以上，可直接用濾清的發(fā)酵液作酶源。因此在主要菌學(xué)性質(zhì)與使用效果上，不同于《特許公報(bào)》昭49-42555及昭50-17560的嗜熱鏈霉菌等菌株（這些菌株在葡萄糖天冬瓊脂上生成黃褐色素;通氣培養(yǎng)溫度40-50℃;而且是產(chǎn)胞內(nèi)葡萄糖異構(gòu)酶類型）。

本發(fā)明的菌株具有以下幾方面特征：

一、所說的菌株的生理特征為：

（1）察氏培養(yǎng)基：生長良好，氣絲乳白色到深灰色，基絲由白到黃褐色，不形成可溶性色素。

（2）淀粉瓊脂：生長良好，氣絲由白色到灰色，基絲由乳白色到淺黃色，不形成可溶性色素。

（3）馬鈴薯浸汁：生長良好，氣絲由白色到灰褐色，基絲由金黃色到淺褐色，不形成可溶性色素。

（4）酪氨酸瓊脂：生長困難，少數(shù)菌落氣絲由白色到灰褐色，不形成可溶性色素，酪氨酸酶為陰性。

（5）葡糖天冬素瓊脂：生長良好，氣絲由白色到灰色，基絲由乳白色到淺黃色，不形成可溶性色素。

（6）葡糖蛋白胨瓊脂：生長良好，氣絲由白到淺灰色，基內(nèi)菌絲由白色到淺褐色，不形成可溶性色素。

（7）明膠培養(yǎng)基：生長一般，液化明膠能力較弱。

（8）牛奶培養(yǎng)基：生長一般，對牛奶的凝固能力較強(qiáng)。

（9）碳源利用：能夠很好的利用淀粉、葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖、鼠李糖、甘露醇、肌醇;很難利用棉子糖。

二、所說的菌株的形態(tài)特征為：

30-50℃在高氏1號(hào)培養(yǎng)基上生長良好，培養(yǎng)3天氣絲由白色到灰色，培養(yǎng)3-5天產(chǎn)生灰色胞子。菌落為園形，似傘狀，表面呈粉狀，胞子絲形狀為：彎曲至形成螺旋。胞子形狀為：園形、橢園形。

本發(fā)明進(jìn)一步提供了StreptomycesM1033斜面、種子、發(fā)酵方法、發(fā)酵清濾液的分離方法及其葡萄糖異構(gòu)酶的固定化方法，即說明書附圖前五步工序所采用的條件和方法：

（1）異構(gòu)酶菌種斜面：即菌株的斜面培養(yǎng)基和斜面培養(yǎng)方法，也就是菌株，首先在淀粉1-3%，硝酸鉀0.05-0.5%，磷酸氫二鉀0.01-0.1%，硫酸鎂0.01-0.1%，氯化鈉0.01-0.1%，硫酸亞鐵0.001-0.005%，瓊脂1.5-2%的斜面培養(yǎng)基上，高溫30℃-50℃培養(yǎng)4～6天。