[其他]用細(xì)菌培養(yǎng)生產(chǎn)透明質(zhì)酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 85103674
• 申請日: 1985-05-13
• 公開（公告）號: CN85103674A
• 公開（公告）日: 1986-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 布雷克;撒克爾
• 申請（專利權(quán)）人: 戴格諾斯蒂克公司
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;A61K31/725;//
• 代理公司: 上海專利事務(wù)所
• 代理人: 顏承根

1、一種生產(chǎn)透明質(zhì)酸的方法，包括：

在二氧化碳富集，無氧的情況下在生長培養(yǎng)基中使可產(chǎn)生透明質(zhì)酸的鏈球菌的肉湯培養(yǎng)物發(fā)酵；

使細(xì)菌細(xì)胞與發(fā)酵后肉湯分離；及從肉湯剩下的組成物中離析透明質(zhì)酸。

2、為權(quán)利要求1所述的方法，其中在接種前通過一萬分子量截止過濾器對生長培養(yǎng)基進(jìn)行過濾，使生長培養(yǎng)基做到無熱原。

3、為權(quán)利要求1所述的方法，其中細(xì)菌細(xì)胞分離步驟包括首先將三氯乙酸加進(jìn)肉湯。

4、如權(quán)利要求3所述的方法，其中三氯乙酸應(yīng)加到使發(fā)酵混合物的最終濃度為5-6%為止。

5、為權(quán)利要求3所述的方法，其中添加上述三氯乙酸后細(xì)菌的生長就終止。

6、為權(quán)利要求1所述的方法，其中離析的完成是通過分離酸及那些具有類似的或較高分子量的肉湯組成物然后用沉淀法使酸與那些相似的肉湯組成物分離。

7、如權(quán)利要求6所述的方法，其中沉淀是通過將透明質(zhì)酸及剩余肉湯組成物加到醇中去而不作實(shí)質(zhì)性混合來完成的。

8、如權(quán)利要求1所述的方法其中離析是通過使肉湯和細(xì)胞分離滲析過濾肉湯，及將溶液加到有機(jī)溶劑中去而不作實(shí)質(zhì)性混合，使酸在溶液中沉淀來完成的。

9、如權(quán)利要求1所述的方法，其中發(fā)酵步驟包括在發(fā)酵全過程中將PH值控制在6.5-7.5的范圍中基本上為恒定值±0.1、且將溫度控制在37±1℃。

10、如權(quán)利要求9所述的方法，其中PH值的控制是通過用PH探頭/控制器來自動加堿。

11、如權(quán)利要求1所述的方法，其中溶解的二氧化碳濃度維持在約為5-10%。

12、如權(quán)利要求1所述的方法，其中在細(xì)菌停止生長前生長到密度為每毫升2億細(xì)胞。

13、如權(quán)利要求1所述的方法，其中細(xì)菌為18型化膿性鏈球菌。

14、如權(quán)利要求6所述的方法，其中過濾生長培養(yǎng)基是在用細(xì)菌培養(yǎng)物接種前通過一萬分子量截止過濾器進(jìn)行的，且實(shí)行剩余步驟是在100級的凈室中并使用無熱原容器的條件下進(jìn)行的。

15、如權(quán)利要求14中所述的方法，進(jìn)一步包括：精制離析出的透明質(zhì)酸是在將其溶解在溫和的堿性緩沖溶液中，用混合的溴化烷基三甲基銨使透明質(zhì)酸沉淀，在稀氯化鈉溶液中使沉淀物再懸浮及通過將懸浮物加到乙醇，且不作攪拌，對其再沉淀得酸。

16、透明質(zhì)酸其分子量組份范圍約從一萬到二百萬道爾頓，其平均分子量約5.5萬道爾頓±約20%其生產(chǎn)是通過：

在二氧化碳富集的生長培養(yǎng)基中在無氧條件下使可生產(chǎn)透明質(zhì)酸的鏈球菌細(xì)菌的肉湯培養(yǎng)基發(fā)酵;

使細(xì)菌細(xì)胞與發(fā)酵的肉湯分離;及從肉湯的剩余組成物中離析透明質(zhì)酸。

17、為權(quán)利要求16所述的酸，其中細(xì)菌為18型化膿性鏈球菌。

18、為權(quán)利要求16所述的酸，其中離析是通過分離酸與那些有相似的或較高分子量的肉湯組成物及然后用沉淀法將酸與那些相似的肉湯組成物分離來完成的。

19、如權(quán)利要求17所述的酸，其中沉淀是通過將透明質(zhì)酸及剩余的肉湯組成物加到乙醇中去且不作任何實(shí)質(zhì)上的混合來完成的。

20、如權(quán)利要求16所述的酸，其中離析是通過使肉湯和細(xì)胞分離，滲析過濾肉湯及將溶液加到有機(jī)溶劑而不作任何實(shí)質(zhì)性的混合使酸在溶液中沉淀

21、如權(quán)利要求16所述的酸其中蛋白質(zhì)的含量范圍在約0.3%與約0.03%之間，1%的溶液的紫外線吸收在260毫微米時為0.314，在280毫微米時為0.169，且粘度約為300厘拖。

22、為權(quán)利要求21所述的酸，其中離析是通過分離酸與那些有相似的或較高分子量的肉湯組成物及然后用沉淀法將酸與那些相似肉湯組成物分離來完成的。

23、為權(quán)利要求22所述的酸，其中沉淀是通過將酸及剩余的肉湯組成物加進(jìn)乙醇中去而不作實(shí)質(zhì)性的混合來完成的。

24、如權(quán)利要求21所述的酸，其中離析是通過使肉湯與細(xì)胞分離滲析過濾肉湯及將溶液加到有機(jī)溶劑中去而不作實(shí)質(zhì)性的混合，使酸在溶液中沉淀來完成的。