[其他]起交叉反應的環周子孢子蛋白保護性抗原決定基的制造方法

無效

• 申請號: 85107448
• 申請日: 1985-10-10
• 公開（公告）號: CN85107448A
• 公開（公告）日: 1987-04-15
• 發明（設計）人: 尤利斯·沃加拉;安德里斯·魯茨;阿特羅·弗爾拉;魯思·S·納森威格;維克托爾·N·納森威格
• 申請（專利權）人: 紐約大學
• 主分類號: C07K7/04
• 分類號: C07K7/04;A61K37/02;A61K39/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 辛敏忠,顧柏棣

本發明提供對瘧疾有保護性免疫作用的多肽抗原的制造方法及，將其用于制備疫苗的方法。該抗原具有與環周子孢子蛋白氨基酸順序片段相對應的氨基酸順序，它們位于這些蛋白串聯重復部分的外部。本發明的抗原可用來誘發抗體的形成，這種抗體不僅能識別同種瘧原蟲抗原，也可識別它種瘧原蟲抗原。

本申請參照下述各專利的發明：

（a）美國專利，No4，466，917，Nussenzweig，R.等人，發表于1984年8月21日。

（b）Ellis，J.等人已轉讓的未決美國專利申請，No574，553，題目是：“保護性抗原肽”，于1984年1月27日申請。和

（c）Ellis，J.等人已轉讓的未決美國專利申請，No633，147，于1984年7月23日申請，題目是：“惡性瘧原蟲環周子孢子蛋白的保護性抗原肽”。

大多情況下，瘧疾是通過感染瘧疾病原蟲蚊子的叮咬，把子孢子（瘧疾寄生蟲高度免疫原的形式）注入宿主的血液中，從而引起發病的。子孢子的免疫原性，既使不是唯一地但也大多地存在于一個單獨的抗原即環周子孢子（CS）蛋白中。（F.Zavala，A.H.Cochrane，E.H.Nardin，R.S.Nussengweig和V.Nussenzweig等人在《試驗醫學雜志》（J.Exp.ned），1983年，157卷1947頁，已作了詳述。G.N.Godaon等人在《自然》（Nature）1983年，305卷29頁，報環周子孢子蛋白（CS蛋白），是蚊子唾液中子孢子表面膜多肽的成分之一。該子孢子系由哺乳動物屬的瘧疾寄生蟲而來。子孢子的強免疫原性主要是與CS蛋白有關。此蛋白是子孢子階段所特有，具有重復的抗原決定基的免疫顯性區。諾（耳斯）氏瘧原蟲（猴）CS蛋白從N端到C端的重復序列是：谷氨酰胺-丙氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-丙氨酸-天冬酰胺-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酰胺-脯氨酸。而惡性瘧原蟲CS蛋白的重復四肽序列是：天冬酰胺-丙氨酸-天冬酰胺-脯氨酸。由多個相同或類似的重復的氨基酸序列所組成的合成肽顯示有抗原性，并可用它進一步制造瘧疾疫苗。然而，令人遺撼的是，從CS蛋白免疫顯性區得到的肽，它們之間很少顯示同質性，因而它們只具有種屬特異性的抗原。

由于CS蛋白重復抗原決定基的免疫顯性迄今，還不能肯定：不含重復顯性序列的CS蛋白的其它部分，是否能誘導出影響寄生蟲存活的抗體。很明顯，免疫抗原性本身并不能使那些諸如抗子孢子保護性抗原的非重復序列的肽具有實用性，因為這些片段需要在CS分子暴露的表面上才可被抗體識別。

本發明的一個目的是鑒定某一種屬瘧原蟲環周子孢子表面蛋白的一些區域，即含該蛋白非重復性抗原決定基的區域。

本發明的另一個目的是鑒定CS蛋白非重復性抗原決定基，從而生產一種抗瘧疾疫苗。

本發明還有一個目的是鑒定和合成肽（相當于CS蛋白非重復性抗原決定基）。該肽能在哺乳動物中誘導形成抗體，此抗體又可反過來去識別CS蛋白，特別是識別在子孢子表面上的CS蛋白。

本發明進一步的目的是鑒定與合成抗體，此誘導形成的抗體可識別多種瘧原蟲的CS蛋白。

本發明另一目的是以鑒定該肽為前提，進而制造一種合成的瘧疾疫苗。

本發明還有一個目的是進一步生產一種用于制作哺乳動物用的瘧疾疫苗的免疫因子。

本發明旨在生產某一種屬瘧原蟲環周子孢子表面蛋白的某一抗原決定基肽，該肽不是該蛋白重復的免疫顯性抗原決定基序列的肽，但該肽能在宿主中誘導形成識別環周子孢子表面蛋白的抗體。

本發明的肽是通過它誘導形成的抗體與CS蛋白相結合而被識別的。該抗體不但與產生此抗體的某種瘧疾的CS蛋白結合，也能與其它種瘧疾的CS蛋白質相結合。因為，免疫顯性區外的CS蛋白的序列是廣泛同質性的。一旦一種這樣的肽被鑒定，其它具有同樣性質的肽的氨基酸序列（或核苷酸序列）就能容易地通過比較不同種CS蛋白的序列而鑒定出來。這些肽對于制造合成瘧疾疫苗是非常重要的成分。這些瘧疾疫苗可用人工合成的方法，也可用遺傳工程的技術來制造。

圖1是諾（耳斯）氏瘧原蟲CS蛋白細胞內前體的圖解。

圖2是柏氏瘧原蟲（小白鼠）子孢子萃取物與本發明合成的N和C肽抗體相作用的Western免疫吸附放射自顯影圖。

圖3是諾氏瘧原蟲和惡性瘧原蟲CS蛋白免疫顯性決定基外的蛋白片段的圖解。這些片段的排列達到高度的同質性。