[其他]從產(chǎn)生蛋白質(zhì)的培養(yǎng)基中提取和凈化蛋白質(zhì)的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 86101798
• 申請(qǐng)日: 1986-03-19
• 公開（公告）號(hào): CN86101798A
• 公開（公告）日: 1986-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范·威杰南戴爾·弗蘭斯;吉勒斯·丹尼爾;西蒙內(nèi)特·蓋伊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 史密斯克來林-RIT公司
• 主分類號(hào): C07K3/26
• 分類號(hào): C07K3/26
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 劉元金

1、一種從受控酵母細(xì)胞上層清液提取和凈化同細(xì)胞結(jié)合的蛋白質(zhì)的方法，其特征在于這種受控酵母細(xì)胞已產(chǎn)生上述的蛋白質(zhì)，并在非離子型洗滌劑中已將其破碎，這種方法包括下列步驟：調(diào)整上層清液的pH到6(±0.1)，然后再將液體的或固體的聚乙二醇加入到上述上層清液中直至其凈化，并用二價(jià)金屬陽離子或硫酸銨在超濾后處理已凈化的上層清液以分離出上述蛋白質(zhì)。

2、依照權(quán)利要求1的工藝程序，在上層清液中加入液體聚乙二醇直到最后濃度在10%和35%（體積/體積）之間的方法。

3、依照權(quán)利要求1的工藝程序，在上層清液中加入固體聚乙二醇，直到最后濃度在6和12%（重量/體積）之間的方法。

4、權(quán)利要求1到3提到的蛋白質(zhì)是肝炎B表面抗原。

5、權(quán)利要求1到3提到的蛋白質(zhì)是α-1-抗胰蛋白酶。

6、依照權(quán)利要求1到5的工藝程序，澄清的上層清液用二價(jià)金屬陽離子處理。

7、權(quán)利要求6提到的二價(jià)金屬陽離子是鈣陽離子或錳陽離子。

8、依照權(quán)利要求6和7，工藝程序還包含沉淀的分離、溶液的超濾、保留物的凝膠滲透、含蛋白質(zhì)的峰流的離子交換色譜法以及最后，第二次凝膠滲透或氯化銫梯度離心分離。

9、依照權(quán)利要求1到5的工藝程序，用硫酸銨處理澄清的上層清液直到40-50%飽和并離析此凈化的蛋白質(zhì)到聚乙二醇相中。

10、依照權(quán)利要求9的工藝程序，最后進(jìn)一步對(duì)聚乙二醇相進(jìn)行超濾，接著用凝膠滲透和離子交換色譜法。

11、按照權(quán)利要求9的方法，最后進(jìn)一步對(duì)乙二醇相進(jìn)行超濾，接著用離子交換色譜法和凝膠滲透。

12、依照權(quán)利要求2的工藝程序，對(duì)澄清的上層清液進(jìn)行超濾，并用硫酸銨處理保留物直到40-50%飽和，以使轉(zhuǎn)移到合適的緩沖液中的蛋白質(zhì)沉淀。

13、依照權(quán)利要求12的工藝程序，再進(jìn)一步采用超濾、凝膠滲透和離子交換色譜法。

14、依照權(quán)利要求1到5的任意一項(xiàng)方法，非離子型洗滌劑是一種聚山梨酸酯。

15、依照權(quán)利要求14的方法，聚山梨酸酯是聚山梨酸酯20。