[其他]以親和力層析法純化血紅素及改良血紅素

在審

• 申請號: 86104458
• 申請日: 1986-06-26
• 公開（公告）號: CN86104458A
• 公開（公告）日: 1987-07-01
• 發明（設計）人: 夏仁長
• 申請（專利權）人: 希莫索爾公司
• 主分類號: A61K35/18
• 分類號: A61K35/18;G01N33/72;C07K3/20
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 王巍

1、一種由含(氧)血紅素溶液或混合物隔離(氧)血紅素之方法，包括：

(a)制動一多元陰離子特定的束縛血紅素經由其多元陰離子束縛處于一層析的凝膠；及

(b)經由凝膠傳送該含(氧)血紅素溶液或混合物，其中該(氧)血紅素保留于凝膠上，而同時溶液或混合之其他成份被洗提(eluted)。

2、一種由（氧）血紅素溶液或混合物隔離（氧）血紅素之方法，包括：

（a）提供一層析的凝膠它具有一制動多元陰離子，特定的經由其多元陰離子束縛處束縛血紅素;及

（b）經由凝膠傳送含（氧）血紅素溶液或混合物，其中（氧）血紅素是選擇上保留于凝膠上，而同時其他成份經由此傳送。

3、如權利要求第1項或第2項所述之方法，其中該多元陰離子由下列所選擇，包括核苷三磷酸鹽（nucleoside??triphosphate），1，3-二磷酸甘油酸鹽（diphosphoglycerate），一肌醇磷酸鹽及一肌醇硫酸鹽（inositol??sulphate）。

4、如權利要求前項所述之方法，其中該層析的凝膠是由下列所選擇，包括了交聯聚蔗糖凝膠（cross??linked??polysaccharide??gels）及矽膠（silica??gel）。

5、如權利要求前項所述之方法，其中該多元陰離子是藉一疏水性化學空間群連接至層析的凝膠。

6、如權利要求第5項所述之方法，其中該空間群是由下列之劑類選擇，包括己二酸（adipic??acid），二氨基己烷及己二酸二肼（adipic??acid??dihydrazine）。

7、如權利要求前項所述之方法，其中該多元陰離子是三磷酸腺苷（adenosine??triphosphate）或肌醇四或戊磷酸鹽。

8、如權利要求前項所述之方法，其中該凝膠為瓊脂糖凝膠（agarose??gel）。

9、如權利要求第8項所述之方法，其中所述化學空間群劑為己二酸。

10、如權利要求第1項或第2項所述之方法，其中包括了隨后之步驟：

（c）引入一陰離子進入層析的凝膠，它與在原有凝膠之多元陰離子競爭，其中（氧）血紅素由凝膠被洗提。

11、如權利要求第10項所述之方法，其中該競爭陰離子，由遞減效能是從下列選擇包括肌醇己磷酸鹽，三磷酸腺苷，吡哆醛磷酸鹽（pyridoxal??phosphate），二磷酸甘油酸鹽，二磷酸腺苷，磷酸鹽離子及氯離子。

12、一種由一液體溶液含無基質血紅素中分離無基質血紅素（stroma-free??hemoglobin）的方法，包括：

（a）經由一凝膠復合物傳送含溶液無基質血紅素，它包括一層析的凝膠具有制動一多元陰離子，特定的束縛血紅素經由多元陰離子束縛處;及

（b）引入一陰離子進入該凝膠復合物，它與原先含于凝膠中之多元陰離子競爭，其中純化了的無基質血紅素由凝膠被洗提。

13、如權利要求第12項所述之方法，其中于步驟（b）所引入之陰離子及無基質血紅素溶液兩者皆包括一適當緩沖劑，它并不干擾血紅素之束縛于多元陰離子。

14、一種由一液體反應混合物含改良的及未改良的血紅素分離未改良的血紅素之方法，包括：

（a）經由一多元陰離子/層析的凝膠復合物傳送該反應混合物，復合物含一多元陰離子它特定的束縛血紅素經由其多元陰離子束縛處，在一層析凝膠上制動，其中未改良血紅素是保留在凝膠上而改良的血紅素經過該凝膠;及（b）引入一多元陰離子進入凝膠復合物，它與原先在凝膠之多元陰離子競爭，其中純化的未改良血紅素由凝膠洗提出。

15、如權利要求第14項所述之方法，其中所述之多元陰離子/層析的凝膠復合物為ATP-瓊脂糖凝膠（ATP-agarose??gel）。

16、如權利要求第14項或第15項所述之方法，其中該競爭陰離子以遞減有效能由下列選出，包括肌醇己磷酸鹽，三磷酸腺苷，吡哆醛磷酸鹽，二磷甘油酸鹽，二磷酸腺苷，磷酸鹽離子及氮離子。